[發(fā)明專利]柑橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210450121.7
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN103091408A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱偉;包亞君;張沛霞
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇艾蘭得營養(yǎng)品有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 靖江市靖泰專利事務(wù)所 32219
• 代理人: 陸平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物測試領(lǐng)域，尤其涉及柑橘生物類黃酮中橙皮甙的測定方法。

背景技術(shù)

柑橘類黃酮是從柑橘果實(shí)中提取出來的一系列具有顯著生物活性的黃酮類化合物，柑橘類黃酮具有獨(dú)特的芳香性、良好的水溶性和顯著的藥理作用。臨床研究證實(shí)，柑橘類黃酮功能有：1、調(diào)節(jié)血脂，降低血液粘稠度，改善血清脂質(zhì)，延長紅血球壽命并增強(qiáng)造血功能，預(yù)防心腦血管疾病。2、抑制HL-60白血病細(xì)胞生長和溶解癌細(xì)胞的作用。3、能夠有效清除體內(nèi)的自由基及毒素，預(yù)防、減少疾病的發(fā)生。4、消炎、抗過敏、廣譜抗菌、抗病毒作用。黃酮類物質(zhì)既是藥理因子又是重要的營養(yǎng)因子，是一類新發(fā)現(xiàn)的營養(yǎng)素，人體主要依靠從蔬菜、水果和谷物等食物中攝取一定量的黃酮，而黃酮類物質(zhì)在體內(nèi)代謝快需要不斷的補(bǔ)充，柑橘類黃酮特有的生理活性已經(jīng)得到了世界公認(rèn)，目前市場上已有大量的以柑橘類黃酮作為膳食補(bǔ)充劑制成的各種保健品和食品，同時(shí)在化妝品以及醫(yī)藥產(chǎn)品中也得到了廣泛應(yīng)用。

柑橘生物類黃酮混合物尚未有正式的國家標(biāo)準(zhǔn)，在主要活性成分橙皮甙定量檢測方面沒有系統(tǒng)、完善的檢測方法。《中國藥典》中陳皮的橙皮甙測定方法為：色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇：醋酸：水(35：4：61)為流動(dòng)相，供試品提取：在索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80ml，加熱回流2～3小時(shí)，棄去石油醚，藥渣揮干，加甲醇80ml，再加熱回流至提取液無色，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。該方案如用于柑橘生物類黃酮混合物中橙皮甙的測定，一是柑橘生物類黃酮混合物供試品溶液雜質(zhì)太多，等度洗脫不能將雜質(zhì)完全清除，二是索氏提取樣品前處理復(fù)雜，前處理時(shí)間過長，該方法并不完全適用于柑橘生物類黃酮混合物橙皮甙的測定。因此，有必要針對柑橘生物類黃酮混合物的特點(diǎn)制定其中橙皮甙的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種柑橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法，它操作簡便、專屬性和重復(fù)性好、回收率高，能夠準(zhǔn)確測定橙皮甙的含量，從而有效控制柑橘生物類黃酮混合物的質(zhì)量。

本發(fā)明是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的：柑橘生物類黃酮中橙皮甙含量的測定方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）、稀釋溶液的制備：?取20mmol/l的氫氧化鈉溶液和50%甲醇溶液按0.5～1.5：1.5～0.5比例混合均勻；

（2）、對照品溶液的制備：精密稱取橙皮甙和柚皮甙對照品適量，加稀釋溶液制成橙皮甙和柚皮甙濃度均為0.10mg/ml的對照品溶液；

（3）、供試品溶液的制備：精密稱取10-15mg樣品于100ml容量瓶中，加入80ml稀釋溶液，60～70℃超聲10-20min，取出，冷卻至室溫后，用稀釋溶液定容至刻度，取部分溶液用0.45μm微孔濾膜過濾后備用；

（4）、確定色譜條件：色譜柱：C18色譜柱，4.6mm×250mm，5μm；流動(dòng)相和梯度：流動(dòng)相用0.45μm微孔濾膜過濾后，脫氣；流動(dòng)相A：0.1%三氟乙酸水溶液；流動(dòng)相B：0.1%三氟乙酸的甲醇-乙腈1:1溶液；梯度洗脫時(shí)間見圖1；柱溫：35℃?；流速：1ml/min?；?檢測波長：292nm；保留時(shí)間：柚皮苷約?17.6min?；?橙皮甙約?18.0min；

（5）、檢驗(yàn)程序：

????分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，在規(guī)定條件下，每針運(yùn)行時(shí)間應(yīng)三倍于橙皮甙的保留時(shí)間；

系統(tǒng)適應(yīng)性條件：完全分離兩種系統(tǒng)適應(yīng)性物質(zhì)，柱效應(yīng)達(dá)到：理論塔板數(shù)大于2000，橙皮甙和柚皮甙的分離度大于1.5；

通過測得數(shù)據(jù)計(jì)算橙皮甙含量??橙皮甙%=A_樣×C_對×100/A_對×W_樣×100%??式中：C_對：橙皮甙標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度mg/ml；A_樣：樣品峰面積；A_對：橙皮甙標(biāo)準(zhǔn)工作溶液峰面積平均值；W_樣：樣品的質(zhì)量mg。

本發(fā)明操作簡便、專屬性和重復(fù)性好、回收率高，能夠準(zhǔn)確測定橙皮甙的含量，從而有效控制柑橘生物類黃酮混合物的質(zhì)量。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的梯度洗脫時(shí)間。

具體實(shí)施方式