[發明專利]一種高純度他克莫司的制備方法

有效

• 申請號: 201210447477.5
• 申請日: 2012-11-12
• 公開（公告）號: CN102936253A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 張雪霞;段寶玲;任風芝;李寧;陳書紅;劉進懷;李曉露;李麗紅;成曉迅;林毅;王海燕;張艷立;朱秀良;董愛華
• 申請（專利權）人: 華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司
• 主分類號: C07D498/18
• 分類號: C07D498/18
• 代理公司: 石家莊眾志華清知識產權事務所(特殊普通合伙) 13123
• 代理人: 張明月

技術領域

本發明屬于工業微生物技術領域，涉及藥品原料的制備方法，具體涉及到一種從發酵菌絲體中分離純化他克莫司的制備方法。

背景技術

他克莫司（tacrolimus），又名FK506，是一種從筑波鏈霉菌（Streptomyces?tsukubaensis）產生的23元環的大環內酯類的免疫抑制劑，分子式為C₄₄H₆₉NO₁₂，分子量為804.02，結構式如下：

他克莫司為白色結晶，熔點127～129℃，旋光度-84.4°(c=1.02，三氯甲烷)。溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿或乙醚，難溶于己烷或石油醚，不溶于水。

他克莫司具有抑制抗體的產生和移植物的排斥作用及白細胞介素IL-2、IL-3和干擾素IFN-r的產生（海峽藥學，2010，22(11)：148～150）。他克莫司的免疫抑制作用比環孢素A(CsA)強50～100倍（中華器官移植雜志，2000，21(4)：245～247），因而大大降低了臨床使用劑量，可降低原治療費用1/3～1/2，同時不良反應也明顯降低，用于心臟、肺臟移植有很好效果。

美國專利US2006142565報道了一種純化他克莫司的方法，該方法將他克莫司的提取液通過XAD1180樹脂三次純化后，收集他克莫司純度高的部分，用乙酸乙酯萃取后濃縮，加入乙酸乙酯、環己烷和水進行結晶，并重復結晶2～3次，得到HPLC純度為99.84%的他克莫司產品，收率僅為32.6%。該方法步驟繁瑣，需用樹脂進行3次純化后，再用溶劑結晶2～3次，收率很低。

Lee等（Lee?S?Y,?et?al.?J?Microbinl.Bintechnol.?1997，7，278～281）報道了他克莫司發酵液用二氯甲烷萃取，萃取液濃縮后再用乙酸乙酯結晶。該方法的缺點是萃取劑二氯甲烷不但毒性大，而且沸點低，萃取劑回收率低，造成生產成本較高。Arai（?ARAI?M..?J.?Antibint.?Ser.A?1959，13，46～56）描述了一種他克莫司的制備方法，用丙酮萃取發酵液后將萃取液濃縮，得到他克莫司的粗晶體，然后再用甲醇對他克莫司的粗晶體的溶液結晶。該方法的缺點是他克莫司在甲醇溶液中非常容易生成11,11’-二甲氧基他克莫司，造成結晶收率低，雜質含量高。

發明內容

本發明需要解決的技術問題是提供一種高純度的他克莫司的制備工藝，該方法工藝簡單、質量可靠，收率高，適于工業化規模生產藥用級他克莫司原料的生產。

為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：一種高純度他克莫司的制備方法，包括以下步驟

1）用體積百分濃度為80～95%的極性溶液對他克莫司發酵液分離所得的菌絲體進行浸泡，然后再對浸泡液進行固液分離得到他克莫司浸提液，

2）再將此他克莫司浸提液用水稀釋至極性溶液體積百分濃度為25%～40%，然后將稀釋后的浸提液通過大孔脫色樹脂柱進行脫色處理，得他克莫司脫色液；

3）將他克莫司脫色液導入大孔吸附樹脂柱進行吸附，然后用極性溶劑與水的混合溶液對大孔吸附樹脂柱進行梯度解吸，得到他克莫司一次解吸液；

4）濃縮一次解吸液，并用乙酸乙酯或者乙酸丁酯萃取，然后分液并濃縮乙酸乙酯相或者乙酸丁酯相，得到他克莫司粗提物；

5）將他克莫司粗提物用極性溶劑溶解，注入納米聚合物微球層析柱；

6）使用極性溶劑與水的混合液對納米聚合物微球層析柱進行梯度解吸，并分段收集他克莫司解吸液，將濃度大于98.5%的他克莫司解吸液合并，得他克莫司二次解吸液；

7）將上述二次解吸液濃縮并加入有機溶劑結晶，然后固液分離干燥后即得到他克莫司精粉。

本發明的進一步改進在于：所述步驟1）的浸泡過程中每千克菌絲體加入2～4升85～95%的極性溶液。

本發明的進一步改進在于：所述步驟2）脫色處理中所使用的大孔脫色樹脂柱為LX-900或者LSA-700大孔脫色樹脂柱；所述步驟3）中大孔吸附樹脂柱為XF-800或者D101大孔吸附樹脂柱。

本發明的進一步改進在于：所述步驟3）中對大孔吸附樹脂柱進行梯度解吸所使用的極性溶劑和水的混合溶液的體積百分濃度分別為40～50%和80%～90%

本發明的進一步改進在于：所述步驟6）中對納米聚合物微球層析柱進行梯度解吸所使用的極性溶劑和水的混合溶液的體積百分濃度分別為45～55%和80%～85%。