[發(fā)明專利]一種提取植物總蛋白的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210447423.9
• 申請日: 2012-11-09
• 公開（公告）號: CN102924566A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設計）人: 王紹輝;楊瑞;郝敬虹;邢佳毅
• 申請（專利權）人: 北京農(nóng)學院
• 主分類號: C07K1/30
• 分類號: C07K1/30;G01N1/28
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種提取植物總蛋白的方法，包括如下步驟：

（1）取植物材料，加入PVPP和石英砂，用液氮研磨成粉末；

（2）取步驟（1）得到的粉末，加入蛋白質提取緩沖液并振蕩勻漿，然后加入Tris飽和酚進行提取，取有機相；

（3）取步驟（2）得到的有機相，與蛋白質沉淀液混合后靜置，然后離心收集沉淀；

（4）取步驟（3）得到的沉淀，依次進行甲醇清洗、丙酮清洗和冷凍干燥，得到植物總蛋白。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述蛋白質提取緩沖液的制備方法如下：將500mmol?Tris-HCl、50mmol?EDTA、700mmol蔗糖和100mmol?KCl溶于水并用水定容至1L，調節(jié)pH至8.0，使用前加入β-巰基乙醇和各種蛋白酶，使得β-巰基乙醇的濃度為2%、糜蛋白酶的濃度為1.5μg·ml^-1、嗜熱菌蛋白酶的濃度為0.8g·ml^-1、木瓜蛋白酶的濃度為1μg·ml^-1、鏈霉蛋白酶的濃度為1.5μg·ml^-1、胰酶的濃度為15μg·ml^-1、胰蛋白酶的濃度為0.2μg·ml^-1。

3.如權利1或2所述的方法，其特征在于：所述蛋白質沉淀液的制備方法如下：將乙酸銨溶于甲醇，并用甲醇定容，使得乙酸銨的濃度為0.1mol·L^-1。

4.如權利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述植物材料為番茄韌皮部。

5.如權利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：每2g所述植物材料加入0.2g?PVPP。

6.如權利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟（2）為：取1g步驟（1）得到的粉末，加入3mL所述蛋白質提取緩沖液并混勻，加入3mL?Tris飽和酚并混勻，4℃放置30min，然后4℃、10000g離心15min，吸取有機相。

7.如權利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟（2）為：取1g步驟（1）得到的粉末，加入3mL所述蛋白質提取緩沖液并混勻，加入3mL?Tris飽和酚并混勻，4℃放置30min，然后4℃、10000g離心15min，吸取出有機相后再加入3mL所述蛋白質提取緩沖液并混勻，加入3mL?Tris飽和酚并混勻，4℃放置30min，然后4℃、10000g離心15min，吸取有機相。

8.如權利要求1至8中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟（3）為：每管加入250μL步驟（2）得到的有機相和1mL所述蛋白質沉淀液，漩渦混勻，-20℃靜置10小時。

9.如權利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述甲醇清洗進行三次，每次的步驟為：加入500μL?4℃預冷的甲醇，漩渦混勻，4℃、10000g離心10min，棄掉上清液；所述丙酮清洗進行三次，每次的步驟為：加入500μL?4℃預冷的丙酮，漩渦混勻，4℃、10000g離心10min，棄掉上清液。

10.如權利要求8所述的方法，其特征在于：所述甲醇清洗進行三次，每次的步驟為：每管加入500μL?4℃預冷的甲醇，漩渦混勻，4℃、10000g離心10min，棄掉上清液；所述丙酮清洗進行三次，每次的步驟為：每管加入500μL?4℃預冷的丙酮，漩渦混勻，4℃、10000g離心10min，棄掉上清液。