[發明專利]檢測小麥籽粒脂肪氧化酶活性的引物及其應用

有效

• 申請號: 201210447260.4
• 申請日: 2012-11-09
• 公開（公告）號: CN102925576A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 姚大年;吳萍;司紅起;張文明;鄭文寅
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;A01G1/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種檢測小麥籽粒脂肪氧化酶活性的引物對及其應用。

背景技術

小麥是我國的主要儲糧作物之一，良好的儲糧品質對糧食安全具有重要意義。在一般的儲藏條件下，小麥從第二年開始逐漸陳化變質，南方高溫高濕地區尤為明顯。影響小麥儲藏品質的因素較多，包括收獲季節的氣候條件、晾曬、運輸、倉儲等外在環境條件和脂肪氧化酶活性等內在因素，且脂肪氧化酶活性高低是直接影響小麥耐儲藏性的主要內在原因。因此，開發LOX基因的分子標記，利用分子育種手段，培育耐存儲的小麥品種，是解決糧食安全的重要途徑之一。

1932年，Andre和Hou首次提出脂肪氧化酶（LOX或Lpx，lipoxygenase）的存在，在那以后LOX的研究取得快速的發展。研究者們先后在大豆、擬南芥、水稻、向日葵、黃瓜、亞麻、大麥和小麥等作物植株和籽粒中發現了LOX。目前，已有的研究表明，LOX活性低，有利于增強小麥等作物的耐儲藏性。LOX基因在大麥中的研究較多，大麥LOX基因DNA序列已經發表（GenBank編號HVU83904）。在普通小麥中，對LOX的研究較少，王慧等研究發現，LOX活性在基因型間和環境間的差異皆達到極顯著水平，且基因型對小麥LOX活性的效應大于環境及基因型與環境互作效應，認為基因型是影響小麥LOX活性的主要因素，但環境因素亦不可忽視。Hongwei?Geng等在研究普通小麥的TaLox-B1時發現，TaLox-B1位點存在兩個具有SNP的等位基因TaLox-B1a和TaLox-B1b，LOX活性較高的小麥品種含有TaLox-B1a，LOX活性較低的小麥品種含有TaLox-B1b。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測小麥籽粒脂肪氧化酶活性的引物對及其應用。

本發明所提供的檢測小麥脂肪氧化酶活性的引物對，為由序列表中序列1所示的單鏈DNA和序列2所示的單鏈DNA組成的引物對。

其中，序列1由21個核苷酸組成；序列2由23個核苷酸組成。

所述檢測小麥籽粒脂肪氧化酶活性的引物對在檢測小麥脂肪氧化酶活性中的應用也屬于本發明的保護范圍。

本發明的另一個目的是提供一種檢測小麥脂肪氧化酶活性的方法。

本發明所提供的檢測小麥脂肪氧化酶活性的方法具體可包括如下步驟：

（1）以待測小麥的基因組DNA為模板，以所述引物對進行PCR擴增，獲得PCR

（2）檢測步驟（1）所得PCR產物的大小，按照如下方法確定所述待測小麥的脂肪氧化酶活性：若所述PCR產物中含有大小為677bp的DNA片段，則所述待測小麥為脂肪氧化酶活性高的小麥或候選為脂肪氧化酶活性高的小麥；若所述PCR產物中不含有大小為677bp的DNA片段，則所述待測小麥為脂肪氧化酶活性低的小麥或候選為脂肪氧化酶活性低的小麥。

在上述方法中，所述檢測步驟（1）所得PCR產物的大小的方法是將所述PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳，若所述PCR產物在瓊脂糖凝膠電泳上顯示677bp的一個條帶，則所述待測小麥為脂肪氧化酶活性高的小麥或候選為脂肪氧化酶活性高的小麥；若所述PCR產物在瓊脂糖凝膠電泳上不顯示677bp的一個條帶，則所述待測小麥為脂肪氧化酶活性低的小麥或候選為脂肪氧化酶活性低的小麥。

本發明所提供的檢測小麥脂肪氧化酶活性的方法具體也可包括如下步驟：

（1）以待測小麥的基因組DNA為模板，以所述引物對進行PCR擴增，獲得PCR產物；

（2）檢測步驟（1）所得PCR產物的大小，按照如下方法確定所述待測小麥的脂肪氧化酶活性：若所述PCR產物為大小分別是475bp、677bp和786bp的三個DNA片段，則所述待測小麥為脂肪氧化酶活性高的小麥或候選為脂肪氧化酶活性高的小麥；若所述PCR產物中為大小分別是475bp和786bp的兩個DNA片段，則所述待測小麥為脂肪氧化酶活性低的小麥或候選為脂肪氧化酶活性低的小麥。

在上述方法中，所述檢測步驟（1）所得PCR產物的大小的方法是將所述PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳，若所述PCR產物在瓊脂糖凝膠電泳上同時顯示475bp、677bp和786bp三個條帶，則所述待測小麥為脂肪氧化酶活性高的小麥或候選為脂肪氧化酶活性高的小麥；若所述PCR產物在瓊脂糖凝膠電泳上同時顯示475bp和786bp兩個條帶，則所述待測小麥為脂肪氧化酶活性低的小麥或候選為脂肪氧化酶活性低的小麥。