[發明專利]一種表達羰基還原酶的重組工程菌及其應用有效
| 申請號： | 201210440849.1 | 申請日： | 2012-11-07 |
| 公開（公告）號： | CN103013898A | 公開（公告）日： | 2013-04-03 |
| 發明（設計）人： | 金志華;胡升;楊岳微;姚成志;王愛珂;金慶超;楊郁;梅樂和;高然 | 申請（專利權）人： | 寧波美諾華藥業股份有限公司;浙江大學寧波理工學院 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12P17/00;C12P7/62;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡紅娟 |
| 地址： | 315040 浙江省寧波市高*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 羰基 還原酶 重組 工程 及其 應用 | ||
1.一種表達羰基還原酶的重組工程菌，包括宿主細胞和轉入宿主細胞的重組載體，所述重組載體由原始載體及插入原始載體的目的基因構成，其特征在于，所述宿主細胞為大腸桿菌(E.coli)Rosetta(DE3)，所述目的基因為羰基還原酶基因，堿基序列如SEQ?ID?NO.1所示。
2.如權利要求1所述的重組工程菌，其特征在于，所述原始載體為pET-28a(+)。
3.如權利要求1～2任一所述重組工程菌在生產手性藥物中間體中的應用，所述手性藥物中間體為(S)-氮，氮-二甲基-3-羥基-3-(2-噻吩)-l-丙胺或(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯。
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將所述重組工程菌接入培養基，誘導培養后收集菌體細胞；
(2)將菌體細胞懸浮于pH6～7的緩沖液中，加入原料和共底物，反應完成后，分離純化得到手性藥物中間體；
所述原料為氮，氮-二甲基-3-氧代-3-(2-噻吩)-l-丙胺或其鹽酸鹽、4-氯乙酰乙酸乙酯。
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述反應的溫度為30～35℃。
6.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述反應的時間為24～48h。
7.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述共底物為葡萄糖。
8.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述原料的濃度為2～5g/L，所述共底物的濃度為5～12g/L，所述菌體細胞的濃度為2～10g/L。
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