[發(fā)明專利]一種綜合利用Cohn組分IV的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210438973.4
• 申請日: 2012-11-06
• 公開（公告）號: CN102977180A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇志國;李巖;楊延麗;于孟冉
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院過程工程研究所
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/22;C07K1/16;C07K1/34;C07K14/47;C07K14/79;C07K14/765;C07K14/775;C07K14/81;C07K16/06;C12N9/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白制備領(lǐng)域，尤其涉及綜合利用Cohn組分IV的方法。

背景技術(shù)

目前，從血漿中制備白蛋白和IgG所采用的大都為Cohn冷乙醇沉淀法。這種方法中的組分IV中主要是含有蛋白，其中包括很多有潛在價值的蛋白質(zhì)，但現(xiàn)在通常作為廢棄物丟掉。其中這些蛋白無論作為臨床使用還是作為生化診斷試劑都有著非常廣闊的前景。比如α₁-抗胰蛋白酶可以治療α₁-抗胰蛋白酶先天性缺乏伴肺氣腫患者，是美國FDA批準(zhǔn)的藥品；α₂-巨球蛋白：用于質(zhì)量放射損傷的治療以及眼角膜損傷和角膜炎的治療；補體1酯酶抑制劑：遺傳性血管神經(jīng)性水腫；結(jié)合珠蛋白：靜脈輸注結(jié)合珠蛋白或用固相化結(jié)合珠蛋白體外循環(huán)去除血液中的游離血紅蛋白，防止和治療溶血性腎衰竭；運鐵蛋白：治療先天性無運鐵蛋白血癥，用脫鐵的運鐵蛋白治療鐵血黃素沉著癥；銅藍(lán)蛋白：促進(jìn)紅細(xì)胞生成，治療貧血。此外血液中的很多檢測指標(biāo)都是針對某一種蛋白的檢測，這對于判斷疾病類型有著重要的臨床意義，而檢測試劑盒的制備需要采用純度非常高的抗原來免疫動物，得到相應(yīng)的抗體。這類產(chǎn)品的市場空間也非常大，因為隨著技術(shù)的成熟，會有越來越多的醫(yī)院都采用這類檢測指標(biāo)更有效的輔助疾病類型的判斷。比如銅藍(lán)蛋白的升高可以作為某些疾病的前兆，現(xiàn)在醫(yī)院對于載脂蛋白檢測的需求也越來越多。

目前有一些專門針對組分IV中某一種蛋白質(zhì)進(jìn)行分離的報道，比如黃凱等人用尿素溶解組分IV，然后從中提取載脂蛋白A1（CN?101205250A），此方法中采用的尿素濃度可以高達(dá)6-8M，這可能會對組分IV中其它的組分造成潛在的破壞。

周燕翔等人采用Con?A?Sepharose?4B以及DEAE?Sepharose?FF從組分IV中分離α₁-抗胰蛋白酶（周雁翔，端義坤，李策生，彭良俊，張愛華，鄒漢武，低溫乙醇法分離正常人血漿組分IV沉淀中α₁-抗胰蛋白酶的分離純化，中國生物制品學(xué)雜質(zhì)，2011，24：1090-1093）。Coan等人采用PEG沉淀結(jié)合DEAE離子交換層析的方法從組分IV中提取α₁-抗胰蛋白酶（Coan?MH,Brockway?WJ,Eguizabal?H,Krieg?T,Fournel?M.Preparation?and?properties?of?alpha1-proteinaseinhibitor?concentrate?from?human?plasma.Vox?Sanguinis,1985,48:333–342）。這些方法中要么采用了沉淀技術(shù)，要么采用親和層析技術(shù)，所使用的工藝與本發(fā)明不同。

Deutsch等人采用硫酸銨沉淀、DEAE層析以及乙醇-氯仿沉淀的工藝從組分IV中提取銅藍(lán)蛋白（Deutsch?HF,Kasper?CB,Walsh?DA,Papid?method?forpreparation?of?crystalline?human?ceruloplasmin?from?Cohn?Fraction?IV-1.Archives?ofBiochemistry?and?Biophysics,1962,99:132-135）。該工藝采用兩步沉淀，而且其中一步沉淀為含有氯仿的有機(jī)溶劑沉淀，對蛋白質(zhì)的破壞比較大。

目前也從組分IV同時提取多種蛋白的報道，處理過程包括先對組分IV進(jìn)行PEG沉淀處理，然后再依次用疏水層析和離子交換層析處理，能夠得到的蛋白包括5種（白高英，Cohn組分IV沉淀中血漿蛋白的分離工藝及過程自動化研究，2010，蘭州大學(xué)碩士生學(xué)位論文；Kong?YJ,Li?XN,Bai?GY，Ma?GH,SuZG.An?automatic?system?for?multidimensional?integrated?protein?chromatography,Journal?of?Chromatography?A,2010,1217:6898-6904）。此方法中采用了蛋白損失率較高的沉淀步驟，而且所采用層析的順序也與本發(fā)明存在不同。