[發(fā)明專利]一種八寶景天基因組DNA的提取方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210438729.8 | 申請日： | 2012-11-07 |
| 公開（公告）號： | CN102876665A | 公開（公告）日： | 2013-01-16 |
| 發(fā)明（設計）人： | 周祥明;宋建;王姝 | 申請（專利權）人： | 天津市農(nóng)業(yè)生物技術研究中心 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 天津市杰盈專利代理有限公司 12207 | 代理人： | 朱紅星 |
| 地址： | 300384 天*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 八寶 景天 基因組 dna 提取 方法 | ||
1.?一種八寶景天基因組DNA的提取方法，其特征在于按以下的步驟進行：
(1)取0.2g新鮮葉片放入研缽中，加入0.02g-0.04g石英砂，用液氮充分研磨成粉末，加入預熱的0.5mL?2％CTAB提取液溶解；
所述的2％CTAB提取液是由下述原料組成：
2％CTAB????????????????????2g/100mL
2%SDS?????????????????????2g/100mL
2%PVP?????????????????????2g/100mL
pH值為8.0的0.1mol/LTris-Cl??1.1214g/100mL
20mmol/LEDTA??????????????0.744g/100mL
1.4mol/LNaCl????????????????8.19g/100mL
10％的β-巰基乙醇???????????10ml/100mL；
?(2)在55℃～65℃下溫浴45min，取出冷卻后再加入0.5-1mL氯仿-異戊醇混合液，常溫下12000-15000轉(zhuǎn)/分，離心10-15分鐘；其中氯仿與異戊醇的體積比為24∶1；?
(3)取上清液轉(zhuǎn)入新離心管，再加入等體積的氯仿-異戊醇混合液，常溫下12000-15000轉(zhuǎn)/分，離心10-15分鐘；?
(4)取上清液再轉(zhuǎn)入新離心管，并加入上清液2/3體積的冰冷異丙醇混合，-20℃條件下放置15-30min沉淀DNA；
(5)8-10℃，12000-15000轉(zhuǎn)/分，離心10-15分鐘，棄上清液，回收沉淀，用70％乙醇洗滌2次，風干后加入pH值為8.0的TE緩沖液80-100μl；然后加入5-8μL?RNase，37℃保溫1-1.5小時，置于-20℃條件下保存；所述的TE緩沖液包括：10mmol/L?pH=8.0的Tris-Cl和1mmol/L的EDTA。
2.權利要求1所述的提取方法，其中步驟(5)所使用的RNase，儲藏濃度為10mg/mL，終濃度為0.5mg/mL。
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