[發明專利]一種分離純化石杉堿甲的常壓柱色譜組合法

無效

• 申請號: 201210437662.6
• 申請日: 2012-11-06
• 公開（公告）號: CN103804293A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 徐朝暉;阮克鋒;馮怡
• 申請（專利權）人: 上海張江中藥現代制劑技術工程研究中心
• 主分類號: C07D221/22
• 分類號: C07D221/22
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種從草藥蛇足石杉中分離高純度石杉堿甲的方法，具體涉及一種在常壓下采用堿性氧化鋁和硅膠柱色譜組合法分離純化高純度石杉堿甲的方法。

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背景技術

石杉堿甲是我國學者從草藥蛇足石杉(Huperzia?serrata(Thunb.)Trve.)中分離得到的一種生物堿，藥理試驗顯示它是高效、可逆、低毒性的乙酰膽堿酶抑制劑，具有提高記憶的功能。1995年，石杉堿甲在國內上市應用于治療阿爾茲海默癥（AD），商品名哈伯因。1997年，FDA批準其作為食品添加劑或營養保健品在美國銷售。?

石杉堿甲在蛇足石杉中的含量僅萬分之幾，且蛇足石杉本身生長周期長，對生長環境要求高，不便大量人工栽培。而人工合成的制備工藝目前還無法用于工業化的放大生產，因此從植物中分離制備仍然是獲得它的主要途徑。

現已有一些有關石杉堿甲制備的文獻報道。

《從植物中提取石杉堿甲的工藝》（中國專利，?CN?200610017954.9）與本發明方法最為接近。它采用提取原液經氯仿萃取后，萃取物上硅膠柱色譜分離，乙醇氯仿溶液洗脫，所得含石杉堿甲的流份經丙酮重結晶3～4次，得石杉堿甲成品。與本發明主要采用的填料堿性氧化鋁相比，其全程采用的分離填料硅膠載樣量明顯偏小，僅為堿性氧化鋁的1/4左右，而價格卻是堿性氧化鋁的2倍以上，生產成本顯著高于本專利方法；本發明方法比上述專利多上一根色譜柱，但所獲得的柱層析產物經1～2次結晶即可獲得符合《中國藥典》要求的成品，而上述專利需重結晶3～4次，一根色譜柱的洗脫周期為1～2天，而一次結晶的操作周期以2～3天計，上述專利方法的生產周期卻比本發明方法的只長不短，在生產時間成本上也處于劣勢。

文獻還報道了中低壓制備色譜法、制備型高壓液相色譜法、高速逆流色譜法、重結晶法或上述幾種方法的綜合。以上方法或是依賴于昂貴的色譜填料與儀器設備，生產成本高昂；或是樣品處理量小，收率低，生產周期長，難以滿足工業化生產的需要。

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發明內容

????本發明的目的是建立一條經濟實用、便于產業化的石杉堿甲制備工藝路線。

本發明通過以下技術方案實現：

本發明適用的原料為草藥蛇足石杉的粗提物，其中石杉堿甲含量不低于1％。

將粗提物用乙醇或氯仿等有機溶劑溶解，拌入堿性氧化鋁（100-200目）。再按重量比稱取10-100倍量的堿性氧化鋁（100-200目或200-300目），干法裝柱，徑高比1:8～1:30。粗提物干法上樣后，先用氯仿洗脫3倍柱體積，再用氯仿-甲醇（80:1～8:1）洗脫，堿性氧化鋁或硅膠薄層色譜檢測各流份，合并含石杉堿甲的流份，60℃減壓濃縮成干浸膏，稱重后，用氯仿溶解成樣品溶液備用。

再按重量比稱取10-100倍量的硅膠（100-200目或200-300目），氯仿浸泡過夜后，濕法裝柱，徑高比1:8～1:30。樣品溶液濕法上樣后，先用氯仿洗脫3倍柱體積，再用氯仿-甲醇（80:1～8:1）洗脫，硅膠薄層色譜檢測各流份，合并含石杉堿甲的流份，60℃減壓濃縮成干浸膏。

上述干浸膏溶于丙酮，靜置過夜后，即可獲得符合《中國藥典》要求的結晶成品。

分離過程所得中間產物HPLC檢測的色譜條件為：ZORBAX?Eclipse?XDB—C18?不銹鋼柱(150mm?×4.6mm?,?5μm)?（Agilent?Technologies，美國）;?流動相:?甲醇—0.08?mol/L?醋酸銨溶液(32∶68,?用冰醋酸調pH值至6.0)?;?流速:?1?ml/?min；檢測波長:?310?nm;?柱溫:30?℃。

所得成品含量測定的色譜條件遵循《中國藥典》二部，為：ZORBAX?Eclipse?XDB—C18?不銹鋼柱(150mm?×4.6mm?,?5μm)?（Agilent?Technologies，美國）;?流動相:?磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀2.72g，加水1000ml溶解，用磷酸調節pH值至2.5）－乙腈（86∶14）?;?流速:?1?mL/min;?檢測波長:?310?nm;?柱溫:30?℃。

本工藝中的石杉堿甲總回收率可達到80%以上，經1-2次結晶后，所得樣品純度即可符合《中國藥典》的要求。

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附圖說明

圖1?石杉堿甲（Huperzine?A）對照品的HPLC圖譜

圖2?蛇足石杉粗提浸膏的HPLC圖譜

圖3?堿性氧化鋁柱層析產物的HPLC圖譜

圖4?硅膠柱層析產物的HPLC圖譜