[發(fā)明專利]用于鑒定小麥春化基因VRN-A1和VRN-B1的PCR體系

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210436945.9
• 申請(qǐng)日: 2012-11-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102925571A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 穆培源;張曉科;相吉山;張影全;桑偉;徐紅軍;韓新年;聶迎彬;崔鳳娟;鄒波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆農(nóng)墾科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11;A01H1/04;A01H1/02
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.用于鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥春化基因的多重PCR引物對(duì)組，所述小麥春化基因?yàn)閂RN-A1基因和VRN-B1基因，其特征在于：所述多重PCR引物對(duì)組由引物對(duì)組A和引物對(duì)組B組成；所述引物對(duì)組A由特異于所述VRN-A1基因的兩個(gè)引物對(duì)組成；所述引物對(duì)組B由特異于所述VRN-B1基因的兩個(gè)引物對(duì)組成；

所述引物對(duì)組A中，所述特異于VRN-A1基因的兩個(gè)引物對(duì)分別為序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)1，以及序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)2；

所述引物對(duì)組B中，所述特異于VRN-B1基因的兩個(gè)引物對(duì)分別為序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)3，以及序列5和序列7所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)4。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物對(duì)組，其特征在于：所述引物對(duì)組A中，所述序列1、所述序列2、所述序列3和所述序列4共四條單鏈DNA在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為1~1.5：1~1.5：1~1.5：1~1.5；所述引物對(duì)組B中，所述序列5、所述序列6和所述序列7共三條單鏈DNA在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為2~2.5：1~1.5：2~2.5。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的引物對(duì)組，其特征在于：所述引物對(duì)組A中，所述序列1、所述序列2、所述序列3和所述序列4共四條單鏈DNA在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為1：1：1：1；所述引物對(duì)組B中，所述序列5、所述序列6和所述序列7共三條單鏈DNA在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為2：1：2。

4.含有權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組的試劑盒。

5.權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括將權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組中各序列所示單鏈DNA分別單獨(dú)包裝的步驟。

6.權(quán)利要求4所述PCR試劑盒的制備方法，包括如下步驟：將權(quán)利要求1-3中任一所述的引物對(duì)組中各序列所示單鏈DNA分別單獨(dú)包裝后，與下述物質(zhì)中的至少一種包裝在同一試劑盒內(nèi)：PCR反應(yīng)緩沖液、DNA聚合酶和4種dNTP。

7.鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥含有Vrn-A1a、Vrn-A1b、Vrn-A1c和vrn-A1這四種基因中哪一種，以及含有Vrn-B1和vrn-B1這兩種基因中哪一種的方法，包括如下（1）和（2）的步驟：

所述（1）為如下b1）和b2）：

b1）以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組中的所述引物對(duì)組A進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為60℃；

b2）以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組中所述引物對(duì)組B進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為65℃；

（2）檢測(cè)步驟（1）得到的PCR產(chǎn)物的大小，按照如下方法根據(jù)PCR產(chǎn)物確定所述待測(cè)小麥含有Vrn-A1a、Vrn-A1b、Vrn-A1c和vrn-A1這四種基因中哪一種，以及含有Vrn-B1和vrn-B1這兩種基因中哪一種：

以所述引物對(duì)組A進(jìn)行PCR反應(yīng)，若所述PCR產(chǎn)物中同時(shí)含有715bp和624bp的兩個(gè)DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有或候選含有Vrn-A1a基因；若所述PCR產(chǎn)物中含有473bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有或候選含有Vrn-A1b基因；若所述PCR產(chǎn)物中含有493bp的DNA片段、同時(shí)不含有1068bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有或候選含有Vrn-A1c基因；若所述PCR產(chǎn)物中同時(shí)含有493bp和1068bp的兩個(gè)DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有或候選含有vrn-A1基因；

以所述引物對(duì)組B進(jìn)行PCR反應(yīng)，若所述PCR產(chǎn)物中含有709bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有或候選含有Vrn-B1基因；若所述PCR產(chǎn)物中含有1149bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有或候選含有vrn-B1基因。

8.一種培育半冬性小麥品種的方法，包括采用通過(guò)權(quán)利要求7的方法鑒定得到的同時(shí)含有或候選含有vrn-A1基因和Vrn-B1基因的小麥作為親本進(jìn)行育種的步驟。

9.一種培育春性小麥品種的方法，包括采用通過(guò)權(quán)利要求7的方法鑒定得到的含有Vrn-A1a基因、Vrn-A1b基因和Vrn-A1c基因中至少一種的小麥作為親本進(jìn)行育種的步驟。