[發明專利]汗腺樣細胞凍存復蘇液及保持細胞活性的凍存復蘇方法

有效

• 申請號: 201210436501.5
• 申請日: 2012-11-05
• 公開（公告）號: CN103798224A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 付小兵;馬奎;黃沙;盛志勇
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院第一附屬醫院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N5/071
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司 11100
• 代理人: 王淳

1.一種汗腺樣細胞凍存液，其特征在于，其是在血清替代物中添加以下組分配制而成：

人表皮生長因子，濃度為50-100ng/mL；

重組人角質細胞生長因子-Ⅱ，濃度為10-100ng/mL；

三碘甲狀腺原氨酸，濃度為10-50ng/mL；

半琥珀酸氫化可的松，濃度為0.5-1μg/mL；

胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉，濃度為0.01-0.2mL/mL；

牛血清白蛋白，濃度為0.01-1g/mL。

2.如權利要求1所述的凍存液，其特征在于，

所述人表皮生長因子的濃度為60-90ng/mL；

所述重組人角質細胞生長因子-Ⅱ的濃度為20-60ng/mL；

所述三碘甲狀腺原氨酸的濃度為20-40ng/mL；

所述半琥珀酸氫化可的松的濃度為0.6-0.9μg/mL；

所述胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉的濃度為0.03-0.15mL/mL；

所述牛血清白蛋白的濃度為0.1-0.8g/mL。

3.如權利要求1所述的凍存液，其特征在于，

所述人表皮生長因子的濃度為70-80ng/mL；

所述重組人角質細胞生長因子-Ⅱ的濃度為30-50ng/mL；

所述三碘甲狀腺原氨酸的濃度為25-30ng/mL；

所述半琥珀酸氫化可的松的濃度為0.7-0.8μg/mL；

所述胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉的濃度為0.05-0.1mL/mL；

所述牛血清白蛋白的濃度為0.3-0.6g/mL。

4.如權利要求1-3中任一項所述的凍存液，其特征在于，所述血清替代物為Knock-out血清替代物。

5.一種汗腺樣細胞復蘇液，其特征在于，其是在血清替代物中添加以下組分配制而成：

人表皮生長因子，濃度為50-100ng/mL；

重組人角質細胞生長因子-Ⅱ，濃度為10-100ng/mL；

三碘甲狀腺原氨酸，濃度為10-50ng/mL；

半琥珀酸氫化可的松，濃度為0.5-1μg/mL；

胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉，濃度為0.01-0.2mL/mL；

牛血清白蛋白，濃度為0.01-1g/mL。

6.如權利要求5所述的復蘇液，其特征在于，

所述人表皮生長因子的濃度為60-90ng/mL；

所述重組人角質細胞生長因子-Ⅱ的濃度為20-60ng/mL；

所述三碘甲狀腺原氨酸的濃度為20-40ng/mL；

所述半琥珀酸氫化可的松的濃度為0.6-0.9μg/mL；

所述胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉的濃度為0.03-0.15mL/mL；

所述牛血清白蛋白的濃度為0.1-0.8g/mL。

7.如權利要求5所述的復蘇液，其特征在于，

所述人表皮生長因子的濃度為70-80ng/mL；

所述重組人角質細胞生長因子-Ⅱ的濃度為30-50ng/mL；

所述三碘甲狀腺原氨酸的濃度為25-30ng/mL；

所述半琥珀酸氫化可的松的濃度為0.7-0.8μg/mL；

所述胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉的濃度為0.05-0.1mL/mL；

所述牛血清白蛋白的濃度為0.3-0.6g/mL。

8.如權利要求5-7中任一項所述的復蘇液，其特征在于，所述血清替代物為Knock-out血清替代物。

9.一種保持細胞活性的凍存方法，其特征在于，

將待凍存的細胞消化收集離心后，加入如權利要求1-3中任一項所述的凍存液，令細胞濃度為0.5-2×10⁶/mL，以1.5mL/支移至凍存管中，置4℃預冷30分鐘，放入程序降溫儀中以每分鐘降1℃的速度均勻梯度降溫至-80℃、轉移至液氮中長期保存。

10.一種保持細胞活性的復蘇方法，其特征在于，

將凍存的細胞從液氮中取出，在40±3℃水浴中解凍1-3分鐘，加入2-5倍體積已經37℃預熱的如權利要求5至7中任一項所述的復蘇液重懸。