[發明專利]一種乳制品中酪蛋白磷酸肽含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201210433127.3
• 申請日: 2012-11-02
• 公開（公告）號: CN103792298A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 梁艷;王艷萍;任新志;邵振國
• 申請（專利權）人: 內蒙古伊利實業集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 姚亮

1.一種乳制品中酪蛋白磷酸肽含量的檢測方法，其包括以下步驟：

A、酪蛋白磷酸肽原料的純化

將酪蛋白磷酸肽原料溶解后，調整pH值為4.6，定容為0.2g/mL的酪蛋白磷酸肽原料溶液，靜置30min；

將上述溶液在4℃、5000rpm離心15min，取上清液，加入BaCl₂使其濃度為0.05M，混勻后，得到一含有BaCl₂的酪蛋白磷酸肽原料溶液；

以上述含有BaCl₂的酪蛋白磷酸肽原料溶液∶無水乙醇＝1∶2的體積比，在上述含有BaCl₂的酪蛋白磷酸肽原料溶液中加入無水乙醇，混勻后，在4℃靜置12-16小時；

將上述靜置后的溶液在4℃、5000rpm離心15min，棄去上清液，以上述含有BaCl₂的酪蛋白磷酸肽原料溶液∶H2SO4＝1∶0.4的體積比，在沉淀中加入濃度為0.125M的H₂SO₄，然后用濾紙過濾；

取濾液在60-70℃烘干60min，之后在105℃烘干至恒重，得到純化的酪蛋白磷酸肽原料；

B、標準曲線的繪制

將上述純化的酪蛋白磷酸肽原料用超純水制備濃度為0.1mg/100mL、0.5mg/100mL、1mg/100mL、5mg/100mL、10mg/100mL、20mg/100mL的系列標準工作液，采用高效液相色譜儀對該系列標準工作液進行檢測分析，繪制標準曲線；

C、酪蛋白磷酸肽成品的檢測

a、樣品純化

a1、提取

當樣品為液態乳制品時：稱取20g樣品，用濃度為1％的三氯乙酸定容至50mL，超聲10min，靜置過濾得待凈化液；

當樣品為固態乳制品時：稱取5g樣品，用濃度為1％的三氯乙酸溶解后定容至50mL，超聲10min，靜置過濾得待凈化液；

a2、凈化

將固相萃取柱依次用3mL甲醇、3mL水活化，取適當體積的待凈化液轉移至固相萃取小柱中，依次用3mL水和3mL甲醇洗滌，棄去淋洗液后用6mL氨化甲醇洗脫至10mL具塞試管中，整個固相萃取過程流速不超過1mL/min，將洗脫液于50℃下用氮氣吹干，得到殘留物；

b、檢測及計算

將吹干后得到的殘留物用適當體積流動相A定容，過微孔濾膜后，將得到的上清液采用高效液相色譜儀進行檢測，根據標準曲線及樣品的峰面積計算出成品中的酪蛋白磷酸肽含量。

2.如權利要求1所述的檢測方法，其中，所述固相萃取柱為強陽離子交換柱。

3.如權利要求1所述的檢測方法，其中，所述微孔濾膜的孔徑為0.2μm。

4.如權利要求1所述的檢測方法，其中，在所述酪蛋白磷酸肽成品的檢測步驟中，轉移至固相萃取小柱中的待凈化液的體積與用于定容殘留物的流動相A的體積相同。

5.如權利要求4所述的檢測方法，其中，所述轉移至固相萃取小柱中的待凈化的體積與用于定容殘留物的流動相A的體積均為6mL。