[發明專利]一種創制結縷草高頻再生系的方法

有效

• 申請號: 201210428997.1
• 申請日: 2012-10-31
• 公開（公告）號: CN102907322A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 李瑞芬;張杰偉;魏建華;王宏芝;孫振元
• 申請（專利權）人: 北京農業生物技術研究中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種創制結縷草再生愈傷組織系的方法，包括如下步驟：將單粒結縷草種子依次經誘導培養、第一次繼代培養、第二次繼代培養、第三次繼代培養，得到結縷草再生愈傷組織系。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述誘導培養、所述第一次繼代培養、所述第二次繼代培養和所述第三次繼代培養采用的培養材料均源自同一個種子；

所述誘導培養為將所述結縷草種子在誘導培養基中誘導培養，得到誘導愈傷組織；

所述第一次繼代培養為將所述誘導愈傷組織在第一代繼代培養基中第一代繼代培養，得到第一次愈傷組織；

所述第二次繼代培養為將所述第一次愈傷組織在第二代繼代培養基中第二代繼代培養，得到第二次愈傷組織；

所述第三次繼代培養為將所述第三次愈傷組織在第三代繼代培養基中第三代繼代培養，得到再生愈傷組織系；

所述誘導培養基為在液體MS培養基中添加具有如下終濃度的各組分：終濃度2mg/L的2,4-D、終濃度的0.15mg/L?6-BA、終濃度30g·L^-1的蔗糖、終濃度7.0g·L^-1的瓊脂、終濃度0.5g·L^-1的水解酪蛋白、終濃度1mg·L^-1的VB₁、終濃度1mg·L^-1的VB₂，用水補足體積；

所述第一代繼代培養基為在液體MS培養基中添加具有如下終濃度的各組分：終濃度為1mg/L的2,4-D、終濃度為0.2mg/L的6-BA、終濃度為0.2mg/L的ABA、終濃度為40g·L^-1的蔗糖、終濃度為9.0g·L^-1的瓊脂、終濃度為0.5g·L^-1的水解酪蛋白、終濃度為1mg·L^-1的VB₁和終濃度為1mg·L^-1的VB₂，用水補足體積；

所述第二代繼代培養基為將所述第一次繼代培養基中的蔗糖終濃度調整為35g·L^-1、瓊脂終濃度調整為8.0g·L^-1，其他成分和濃度不變，用水補足體積；

所述第三代繼代培養基為將所述第二次繼代培養基中的蔗糖終濃度調整為30g·L^-1、瓊脂終濃度調整為7.0g·L^-1，其他成分和濃度不變，用水補足體積。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述誘導培養的條件為溫度24-26℃、光照強度1000-3000umol?m^-2s^-1下暗培養1個月；

所述第一次、第二次、第三次繼代培養條件均為溫度24-26℃、黑暗培養20天。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

在所述第一次繼代培養后和所述第二次繼代培養前還包括如下步驟：選取第一次繼代愈傷組織中的胚性愈傷組織。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述結縷草種子為去穎后的結縷草種子。

6.一種制備結縷草再生植株的方法，包括如下步驟：在權利要求1-5任一項中的方法中的第三次繼代培養后，將所述結縷草再生愈傷組織系依次經分化培養和生根培養，得到結縷草再生植株；

所述分化培養為將所述結縷草再生愈傷組織系在分化培養基中進行分化培養，得到生芽愈傷組織；

所述分化培養基為在液體MS培養基中添加具有如下終濃度的各組分：終濃度為1.0mg/L?6-BA、終濃度為0.2mg/L?KT、終濃度為0.5mg/L?ZT、終濃度為30g·L^-1蔗糖、終濃度為7.0g·L^-1瓊脂、終濃度為0.5g·L^-1水解酪蛋白，終濃度為1mg·L^-1VB₁、終濃度為1mg·L^-1VB₂，用水補足體積；

在所述分化培養中，所述結縷草再生愈傷組織系的直徑大小均具體為0.3-0.5cm。