[發明專利]一種創制結縷草高頻再生系的方法

有效

• 申請號: 201210428997.1
• 申請日: 2012-10-31
• 公開（公告）號: CN102907322A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 李瑞芬;張杰偉;魏建華;王宏芝;孫振元
• 申請（專利權）人: 北京農業生物技術研究中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及植物組織培養領域，尤其涉及一種創制結縷草高頻再生系的方法。

背景技術

草坪草具有景觀功能、生態功能和運動功能。隨著經濟的快速發展和人民生活水平的不斷提高，草坪對于城市的綠化和環境改善起著越來越重要的作用。人們利用有性雜交、輪回選育等常規育種手段培育出一些草坪草新品種。轉基因技術具有可以定向改良、打破生殖隔離等優點，是草坪草遺傳改良的一種非常有前途的手段。

草坪草與其他植物一樣，組織培養是遺傳轉化操作的前提。目前，盡管有不少報道已建立了各草種的再生體系，但由于大多數草坪草屬異花授粉植物，遺傳背景復雜，組織培養比其他植物更具有難度。

結縷草屬植物（Zoysia?L.）是世界上重要的暖季型草坪草之一，具有很強的生命力和抗逆性，尤其以超群的耐踐踏、耐瘠薄和抗病能力而著稱。結縷草被譽為“最有前途”的草種，其形成的草坪彈力是早熟禾的30-40倍，耗水量比草地早熟禾少30-40%，建植和管理費用比早熟禾低80%左右（胡叔良，1997，發展草坪綠地關鍵問題的探討，中國草地，5（2）：67-70）。正是由于結縷草所具有的這些獨特的優良性狀，使它們成為運動場、開放綠地、邊坡綠化以及水土保持的重要草種，也是適合我國水資源貧乏國情的草坪草種。同時，結縷草也是我國唯一具有出口創匯能力的草種。

因此，建立穩定高效的結縷草組織培養體系不僅具有重要的理論意義，還有實際應用價值。

在結縷草組織培養和遺傳轉化方面，前人已做過一些探索和研究，并取得了一定的研究成果。早在1987年，Al-Khayri等以日本結縷草成熟胚作為實驗材料，通過切離成熟胚誘導愈傷組織，最終獲得再生植株（A1-Khayri?J?M,Huang?F?H,Thompson?LF,et?a1.1987,In?vitro?plant?regeneration?of?zoysia?grass(Zoysia?japonicaSteud.).In?Vitro,23:3;A1-Khayri?J?M,Huang?F?H,Thompson?L?F,et?a1.1989,Plant?regeneration?of?zoysia?grass?from?embryo-derived?callus.Crop?Science,29(5):1324-1325）。但結縷草種子較小，成熟胚的分離操作相對困難，限制其廣泛應用。Inokuma等在1996年首次報道通過培養日本結縷草懸浮細胞系，用純化得到的原生質體再生出植株（INOKUMA?C,SUGIURA?K,CHO?C,et?a1.1996,Plant?regenerationfrom?protoplasts?of?Japanese?lawn?grass.Plant?Cell?Reports,15(10):737-741）。但該操作不僅比較繁瑣，而且再生率較低。之后，人們又以結縷草幼穗、幼胚和根莖作為外植體，試圖通過體胚發生途徑獲得再生植株（NOH?H?Y,CHOI?J?S,AHN?B?J.1995,Plant?regeneration?through?somatic?embryogenesis?in?zoysia?grasses(Zoysiaspp.).Journal?of?the?Korean?Society?for?Horticultural?Science,36(4):582-587；玄松南,陳慧哲,傅亞萍,等.1997，兩種草坪草愈傷組織的誘導及其分化研究.浙江農業學報,9:295-299；GE?Yaxin,TINA?Norton,WANG?Zeng-Yu.2006,Transgeniczoysiagrass(Zoysia?japonica)plants?obtained?by?Agrobacterium-mediatedtransformation.Plant?Cell?Rep,25:792–798），但該方法不僅取材受季節所限，無菌外植體的獲得也是一個難題。不管以哪種外植體再生植株，均有諸多因素影響再生率（齊春輝,韓烈保,黃麟,等.2005，幾種因素對日本結縷草愈傷組織誘導與生長影響的研究.四川草業,4:1-3；張俊衛,唐蜻,包滿珠.2006，日本結縷草成熟種子愈傷組織誘導及植株再生的影響因子分析.中國農業科學,39(2):368-374）。

目前，尚未見有關結縷草高頻再生系的創制方法相關報道或專利。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種創制結縷草再生愈傷組織系的方法。