[發(fā)明專利]雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發(fā)酵菌劑及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210428013.X
• 申請日: 2012-10-31
• 公開（公告）號: CN102936568A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉益平;孫靜;李念珍;熊彥;朱慶;鐘航
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12N1/20;A23K1/16;C12R1/01;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發(fā)酵菌劑及其制備方法和應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)屬于芽孢桿菌屬，桿狀，染色均勻；芽孢0.8×1.5~1.8μm；菌落源或不規(guī)則形，表面色暗；可起皺，形成奶油色或褐色；在培養(yǎng)液中可形成完整的膜，輕度渾濁。

戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）屬于片球菌書，球狀，四聯(lián)活成片狀排列；細(xì)胞直徑約1μm；在MRS培養(yǎng)基上生長良好，菌落生長在表面的呈規(guī)則的圓形，白色扁平；在液體培養(yǎng)基中渾濁，菌體沉淀到培養(yǎng)基底部，呈白色。

戊糖片球菌在厭氧或兼性厭氧條件下生長并產(chǎn)生乳酸等代謝產(chǎn)物，對酸有較強(qiáng)的耐受范圍（pH4.5-8），且產(chǎn)生片球菌素（pediocin）以抑制有害腸道細(xì)菌的生長；但該菌對溫度的耐受范圍相對較低，高于50℃時細(xì)菌失活；健康雞體溫為41.5℃，因此該菌只能作為微生物添加劑添加入飼料中，而不能經(jīng)過高溫，制粒等加工過程。而枯草芽孢桿菌屬于不致病的需氧芽孢桿菌，其芽孢形式的活菌能夠耐酸、耐高溫，穩(wěn)定性較好。

研究發(fā)現(xiàn)，即使是物種相同不同株系的益生菌對腸道不同區(qū)域的特異性粘附有差，發(fā)揮的特異免疫作用也有差。微生物飼料添加劑具有特異的宿主范圍，超出宿主范圍對添加劑的作用效果不大。同時，在動物個體發(fā)育各個階段，將乳酸菌和芽孢桿菌配合使用，不僅能有效抑制大腸桿菌、沙門氏菌的生長，同時產(chǎn)生各種消化酶（如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶）的活性，使對飼料的利用效率高于單一菌株。

常見禽用益生菌使用方式主要是飲水或飼料。但如果用飲水方式添加時，容易受到空氣、紫外線、自來水中消毒劑和金屬離子等作用而降低活性甚至失活，且該種方式受到地域和氣候的影響，對使用量無法控制直接影響發(fā)揮的作用。因此，制成微生物粉狀制劑直接飼喂動物，受外界環(huán)境的影響更易控制并降低，對飼喂量的確定更易被普通養(yǎng)殖戶掌握，便于推廣。

禽用飼料的主要原料成分主要包括玉米粉和豆粕；麥麩蛋白質(zhì)含量很高，氨基酸組成可與整粒小麥相比，因此在禽用飼料中也占有一定比例；但其高纖維、低容重等特征限制其使用比例。通過微生物在固體發(fā)酵過程中提高對飼料原料中蛋白質(zhì)的水解，形成更多可直接被動物腸道吸收利用的小肽（二、三肽），對家禽生長起到促進(jìn)作用；同時，益生菌以活菌形式進(jìn)入腸道后，改變腸道微生物區(qū)系，產(chǎn)生的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等酶活作用也促進(jìn)了對飼料原料的水解和小肽的形成，提高氨基酸、礦物元素的吸收利用，從而提高動物生長或生產(chǎn)性能。因此，通過模擬人工胃腸道環(huán)境優(yōu)選出的枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌以飼料原料為培養(yǎng)基的固體發(fā)酵條件的優(yōu)化，并混合兩微生物菌劑飼喂雞群，提高動物個體生長性能的應(yīng)用意義重大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供兩株從雞盲腸分離得到、并通過人工胃腸道環(huán)境耐受試驗的枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌，并直接以飼料原料為培養(yǎng)基優(yōu)化固體發(fā)酵技術(shù)，制備得到含優(yōu)選雞源枯草芽孢桿菌、戊糖片球菌的微生物制劑及其混合菌劑的應(yīng)用方法。

雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發(fā)酵菌劑的制備方法，菌種選擇：選用枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）SCS4562菌株和戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）SCS4560菌株，枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）SCS4562菌株已于2012年9月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號：CGMCC??NO.6565,分類命名：枯草芽孢桿菌Bacillus?subtilis；

戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）SCS4560菌株已于2012年9月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號：CGMCC?NO.6566,分類命名：戊糖片球菌Pediococcus?pentosaceus；；兩個菌株經(jīng)過發(fā)酵，獲得發(fā)酵產(chǎn)物即為固體發(fā)酵菌劑。

所述的發(fā)酵方法為：

（1)種子培養(yǎng)：將所述的兩個菌株經(jīng)斜面活化后，分別在無菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于40ml液體種子培養(yǎng)基中，以120轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速、37℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)48h，得一級種子液；以接種環(huán)接2～3環(huán)于同樣配方的液體種子培養(yǎng)基中，以120轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速、37℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)36小時，得二級種子液；