[發(fā)明專利]雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發(fā)酵菌劑及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210428013.X
• 申請(qǐng)日: 2012-10-31
• 公開（公告）號(hào): CN102936568A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉益平;孫靜;李念珍;熊彥;朱慶;鐘航
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/00
• 分類號(hào): C12N1/00;C12N1/20;A23K1/16;C12R1/01;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.一種雞源枯草芽孢桿菌和戊糖片球菌的固體發(fā)酵菌劑的制備方法，其特征在于，菌種選擇：選用枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）SCS4562菌株和戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）SCS4560菌株，枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）SCS4562菌株保藏編號(hào)：CGMCC??NO.6565；戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）SCS4560菌株保藏編號(hào)：CGMCC?NO.6566；兩個(gè)菌株經(jīng)過發(fā)酵，獲得發(fā)酵產(chǎn)物即為固體發(fā)酵菌劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的發(fā)酵方法為?：（1)種子培養(yǎng)：將所述的兩個(gè)菌株經(jīng)斜面活化后，分別在無菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于40ml液體種子培養(yǎng)基中，以120轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速、37℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)48h，得一級(jí)種子液；以接種環(huán)接2～3環(huán)于同樣配方的液體種子培養(yǎng)基中，以120轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速、37℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)36小時(shí)，得二級(jí)種子液；

(2)固體發(fā)酵培養(yǎng)：以3%～10%質(zhì)量比的接種量，將二級(jí)種子液接種于經(jīng)121℃、30分鐘滅菌的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，按照料水比1︰0.9-1.5?g/ml和容量比為8%～24%在發(fā)酵瓶進(jìn)行混合后置于恒溫培養(yǎng)箱上，控制環(huán)境溫度在35～42℃，并用帶4層滅菌紗布封口；時(shí)常拍打發(fā)酵瓶壁，使上、中、下料舒散、混合，發(fā)酵72小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；

(3)?含枯草芽孢桿菌活菌的發(fā)酵產(chǎn)物晾干、粉碎，過40目篩，所得粉末即為含枯草芽孢桿菌活菌的固體發(fā)酵產(chǎn)物；

含戊糖片球菌活菌的發(fā)酵產(chǎn)物晾干、粉碎，過40目篩，所得粉末即為含戊糖片球菌活菌的固體發(fā)酵產(chǎn)物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，枯草芽孢桿菌SCS4562斜面活化培養(yǎng)基為牛肉膏0.5%，氯化鈉0.5%，蛋白胨1.0%，葡萄糖2.5%，磷酸二氫鉀0.03%，補(bǔ)水至100%；調(diào)節(jié)pH值至?6.8，置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)20h；

戊糖片球菌SC4560斜面活化培養(yǎng)基為葡萄糖2%，牛肉膏1%，蛋白胨1g，酵母膏0.5%，吐溫-80?0.1%，磷酸氫二鉀0.025%，水合硫酸鎂0.05%，水合硫酸錳0.025%，檸檬酸銨0.2%，乙酸鈉0.5%，加滅菌水至全部溶解，調(diào)節(jié)pH值至5.4，置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)22h。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的液體種子培養(yǎng)基為：

枯草芽孢桿菌（按質(zhì)量百分含量計(jì)）：2.5%葡萄糖，1%蛋白胨，0.5%氯化鈉，0.5%牛肉膏，磷酸二氫鉀0.03%，加滅菌水至全部溶解，調(diào)節(jié)pH值至6.8～7，高壓120℃滅菌30分鐘后冷卻備用；

戊糖片球菌（按質(zhì)量百分含量計(jì)）：葡萄糖2%，牛肉膏1%，蛋白胨1g，酵母膏0.5%，吐溫-80?0.1%，磷酸氫二鉀0.025%，水合硫酸鎂0.05%，水合硫酸錳0.025%，檸檬酸銨0.2%，乙酸鈉0.5%，加滅菌水至全部溶解，調(diào)節(jié)pH值至5.4，高壓113℃滅菌30分鐘后冷卻備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基為：枯草芽孢桿菌與戊糖片球菌相同，將玉米、豆粕、麥麩打碎過40目篩，按照玉米600g，豆粕300g，麥麩50g的比例，高壓115℃滅菌15分鐘，冷卻后無菌條件下加磷酸緩沖液1000ml混勻，自然pH即可。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）所述接種量優(yōu)選5%；步驟（2）所述料水比優(yōu)選1︰1.1?g/ml；步驟（2）所述容量比優(yōu)選16%；步驟（2）所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵溫度優(yōu)選39℃；步驟（2）所述戊糖片球菌發(fā)酵溫度優(yōu)選37℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一所述方法獲得的固體發(fā)酵菌劑。

8.權(quán)利要求7所述的固體發(fā)酵菌劑的應(yīng)用，其特征在于，育雛階段按0.1wt%枯草芽孢桿菌制劑和0.1wt%戊糖片球菌制劑1:1添加入飼料中；育成階段到上市日齡按0.05wt%枯草芽孢桿菌和0.05wt%戊糖片球菌1:1添加入飼料中。