[發明專利]達托霉素高產菌株及制備方法

有效

• 申請號: 201210420714.9
• 申請日: 2012-10-29
• 公開（公告）號: CN102965304A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 梁淑芳;李國順;馬雯;李蓉暉
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N13/00;C12N15/01;C07K7/08;C07K1/18;C07K1/16;C12R1/465
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所(普通合伙) 51124
• 代理人: 梁鑫

1.玫瑰孢鏈霉菌Streptomyces?roseosporus的突變株Streptomyces?roseosporus?SCU，其保藏號為CGMCC?No.6356。

2.制備權利要求1所述的突變株Streptomyces?roseosporus?SCU的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）、對野生型玫瑰孢鏈霉菌（Streptomyces?roseosporus）進行甲基磺酸乙酯（EMS）/紫外復合誘變處理，涂布斜面，培養，得誘變處理突變株；

2）分別將步驟1）所得的突變株斜面培養物制備孢子懸液，涂布含有達托霉素的固體平板，培養，即得耐受達托霉素的玫瑰孢鏈霉菌；

3）、分別挑取步驟2）所得耐受達托霉素的玫瑰孢鏈霉菌單菌落進行搖瓶發酵培養，檢測發酵物中的達托霉素產量，選擇達托霉素產量比出發菌株高的菌株，得到了Streptomyces?roseosporus?SCU。

3.制備達托霉素的方法，其特征在于以發酵6～7天的玫瑰孢鏈霉菌Streptomyces?roseosporus菌液為原料分離純化得到達托霉素。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于包括以下步驟：收集發酵6～7天的玫瑰孢鏈霉菌Streptomyces?roseosporus菌液，離心收集得到上清液；用正丁醇萃取后用HCl調節溶液pH?3.5～4.5，用雙蒸水沖洗正丁醇，pH維持3.5～4.5；再加入雙蒸水并調節pH6.5～7.3；在水相中加入CaCl₂，用正丁醇萃取，收集正丁醇萃取物，與雙蒸水混合后，用HCl調節pH3.5～4.5，雙蒸水沖洗一次移除Ca₂^＋；去除水相，將醇相與雙蒸水混合，以調節至pH7.0，達托霉素以鈉鹽形式存在于水相中，除去正丁醇，獲得純度80%以上達托霉素粗提物。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于包括以下步驟：收集發酵6～7天的玫瑰孢鏈霉菌Streptomyces?roseosporus菌液，離心收集得到上清液；用正丁醇萃取后用HCl調節溶液pH3.5，用雙蒸水沖洗正丁醇，pH維持3.5；再加入雙蒸水并調節pH7.3；在水相中加入CaCl₂，用正丁醇萃取，收集正丁醇萃取物，與雙蒸水混合后，用HCl調節pH3.5，雙蒸水沖洗一次，保持pH3.5移除Ca₂^＋；去除水相，將醇相與雙蒸水混合，以調節至pH7.0，達托霉素以鈉鹽形式存在于水相中，除去正丁醇，獲得純度80%以上達托霉素粗提物。

6.根據權利要求4或5所述的方法，其特征在于還包括以下步驟：將所述達托霉素粗提物再用硅膠柱層析色譜、陰離子交換樹脂或高效液相色譜進一步分離純化，最終得到純度90%以上的達托霉素制品。

7.根據權利要求3～6任一項所述的方法，其特征在于所述的玫瑰孢鏈霉菌Streptomyces?roseosporus為其突變株Streptomyces?roseosporus?SCU。