[發(fā)明專利]一種針對(duì)蚊媒病毒的懸浮芯片多重非診斷性檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210420139.2
• 申請(qǐng)日: 2012-10-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102943128A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王靜;王旺;楊宇;劉麗娟;趙婷婷;韓輝;孫肖紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 北京中創(chuàng)陽(yáng)光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11003
• 代理人: 張飆

1.一種針對(duì)蚊媒病毒的懸浮芯片多重非診斷性檢測(cè)方法，其特征在于，該方法具體為：

1）根據(jù)PCR擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)的核苷酸序列設(shè)計(jì)特異性檢測(cè)引物，并提交GENEBANK檢測(cè)引物的特異性，合成時(shí)將上游引物5’末端連接特異Tag，下游引物5’末端進(jìn)行生物素標(biāo)記；

2）PCR反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)產(chǎn)物分別與相應(yīng)的編碼微球雜交；

3）微球上的Anti-Tag在一定的條件下特異的捕獲PCR產(chǎn)物上的Tag序列；

4）加入鏈霉親和素－藻紅蛋白與微球上捕獲的PCR產(chǎn)物上的生物素結(jié)合，利用懸浮芯片LUMINAX系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)激發(fā)微球基質(zhì)上的紅色分類熒光和微球表面經(jīng)特異性反應(yīng)結(jié)合上的藻紅蛋白，對(duì)待檢測(cè)物進(jìn)行定性和定量分析；

其中，所涉及的引物序列為：

。

2.如權(quán)利要求1所述的非診斷性檢測(cè)方法，其特征在于，所述引物上游引物5’端需要人工添加一段標(biāo)簽并且之間用間隔序列相連，下游引物5’端經(jīng)生物素標(biāo)記。

3.如權(quán)利要求1所述的非診斷性檢測(cè)方法，其特征在于，所述雜交中同時(shí)加入微球，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，SA-PE，條件為37℃進(jìn)行雜交，同時(shí)此條件下可以進(jìn)行鏈霉親和素－藻紅蛋白與微球上捕獲的PCR產(chǎn)物上的生物素結(jié)合。

4.一種改進(jìn)的針對(duì)蚊媒病毒的懸浮芯片多重非診斷性檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：1）PCR檢測(cè)引物標(biāo)記Tag和生物素，2）PCR擴(kuò)增待檢樣品；3）加入相應(yīng)的微球與PCR產(chǎn)物雜交；4）上機(jī)對(duì)雜交后的微球進(jìn)行檢測(cè)；其中，根據(jù)待檢測(cè)的病毒，設(shè)計(jì)檢測(cè)所用的特異引物，上游引物5’標(biāo)記不同的Tag,引物與Tag之間連接C9或C18作為加臂，下游引物5’進(jìn)行生物素標(biāo)記，以便檢測(cè)。

5.如權(quán)利要求4所述的非診斷性檢測(cè)方法，其特征在于，所述非診斷性檢測(cè)方法涉及的引物序列為：

。

6.如權(quán)利要求5所述的非診斷性檢測(cè)方法，其特征在于，所述引物上游引物5’端需要人工添加一段標(biāo)簽并且之間用間隔序列相連，下游引物5’端經(jīng)生物素標(biāo)記。

7.如權(quán)利要求5所述的非診斷性檢測(cè)方法，其特征在于，所述雜交中同時(shí)加入微球，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，SA-PE，條件為37℃進(jìn)行雜交，同時(shí)此條件下可以進(jìn)行鏈霉親和素－藻紅蛋白與微球上捕獲的PCR產(chǎn)物上的生物素結(jié)合。