[發明專利]狂犬病毒糖蛋白與核蛋白的抗原表位多肽及其篩選、鑒定方法與應用

無效

• 申請號: 201210418662.1
• 申請日: 2012-10-29
• 公開（公告）號: CN102924571A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 朱乃碩;胡曉波
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C12N15/47;C12N15/63;C07K19/00;C12Q1/02;A61K39/205;A61P31/14;G01N33/68
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.一種狂犬病毒糖蛋白與核蛋白的抗原表位多肽，其特征在于具有MHC限制性的特征，并且所述抗原為如下(a)或?(b)所示的蛋白質：，

(a)?由SEQ.ID?.NO.1、SEQ.ID?.NO.2、SEQ.ID?.NO.3或SEQ.ID?.NO.4所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(b)?在(a)中的氨基酸經過取代、缺失或添加1~5個氨基酸且具有狂犬病抗原表位活性的由(a)衍生的蛋白質。

2.編碼如權利要求1所述蛋白質(a)或?(b)的基因，其特征在于具有：

(a)?由序列表中SEQ.ID?.NO.1、SEQ.ID?.NO.2、SEQ.ID?.NO.3或SEQ.ID?.NO.4所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(b)?在?(a)中的氨基酸經過取代、缺失或添加1~5個氨基酸且具有狂犬病抗原表位活性的由?(a)衍生的蛋白質。

3.含權利要求2所述基因的原核表達載體。

4.如權利要求1所述的狂犬病毒糖蛋白與核蛋白的抗原表位多肽，其特征在于所述的4條多肽以任意順序直接連接或者通過連接肽連接而成。

5.一種如權利要求1所述的狂犬病毒糖蛋白與核蛋白表位多肽的篩選鑒定方法，其特征在于具體步驟為：

????（1）通過生物信息學軟件BIMAS、SYFPEITHI以及RANKPEP對從NCBI獲取的狂犬病毒糖蛋白與核蛋白序列進行預測分析，選擇一定參數，選取結果中排名考前的序列作為候選表位序列；?

????（2）合成候選表位序列，通過體外淋巴細胞增殖的實驗對候選表位進行第一次篩選，選擇刺激指數SI＞2的多肽進行下一步實驗；

????（3）經過第一次篩選獲得的多肽序列用ELISPOT實驗和流式細胞法檢測，檢測指標主要是多肽刺激細胞因子IFN-γ和IL-4的分泌情況以及對CD3⁺CD4⁺/?CD3⁺CD8⁺T細胞亞群的影響情況；

（4）通過對實驗結果的分析，確定最后的表位多肽。

6.如權利要求1或權利要求4所述的多肽在制備狂犬病毒疫苗中的應用。

7.如權利要求1或權利要求4所述的多肽在制備狂犬病免疫功能及狂犬病疫苗免疫功能檢測試劑盒中的應用。