[發明專利]重組潤滑素分子及其用途

無效

• 申請號: 201210414650.1
• 申請日: 2004-08-13
• 公開（公告）號: CN102924584A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: C.R.弗蘭納里;C.J.科爾科蘭;B.A.弗里曼;L.A.拉西
• 申請（專利權）人: 惠氏公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/12;C12N15/63;C12P21/02;A61K38/17;A61P19/04;A61P9/00;A61P11/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;萬雪松

本申請是申請日為2004年8月13日的中國專利申請200480029904.1“重組潤滑素分子及其用途”的分案申請。

技術領域

本發明涉及新的重組潤滑素分子及其作為潤滑劑、抗粘連劑和/或關節內補充物應用于例如，滑膜關節、半月板、腱、腹膜、心包和胸膜的用途。

背景技術

滑膜關節的最佳功能性依賴于關節組織間極低的摩擦系數。通常，關節軟骨上保持了一個鄰接且潤滑良好的表面。但在骨關節炎(OA)期間，潤滑程度的降低促使了軟骨基質降解和原纖維形成；這隨后促成了關節功能異常和疼痛。潤滑程度的降低也可以導致包括風濕性關節炎(RA)在內的關節功能障礙和其它關節炎形式的疼痛。

潤滑表面也有助于其它組織(例如腱)實現最佳功能性。正常腱功能除必需潤滑表面外，還必需防止腱表面的細胞粘連。例如，在屈肌腱的損傷和修復中，腱粘連的形成是最常見的并發癥。

天然潤滑素蛋白與巨核細胞刺激因子(MSF)前體蛋白相關。PRG4(蛋白聚糖4)是對MSF的命名，已被UCL/HGNC/HUGO人基因命名數據庫采用。US6433142和US20020137894(本文所引用的全部專利和專利申請均被完整引入作為參考)描述了PRG4蛋白(即MSF前體蛋白)。由PRG4基因的外顯子6編碼的多肽被強糖基化后，似乎對PRG4-相關蛋白在例如，關節軟骨表面之間充當潤滑劑而言必不可少。

有研究指出覆蓋腱鞘的內膜滑膜細胞也可合成PRG4糖蛋白；該糖蛋白也很可能來源于腱細胞(Rees?et?al.，2002)。該糖蛋白主要存在于腱的纖維軟骨區。作為對其滑液功能的補充，該糖蛋白可能通過阻止細胞粘連腱表面，以及通過在腱行使正常功能期間提供潤滑，從而對腱起重要的細胞保護作用。

PRG4(也被稱為“潤滑素”)基因的外顯子6編碼大約76-78個重復的KEPAPTT樣序列和6個重復的XXTTTX樣序列。改變本發明所述重組潤滑素蛋白中可比重復序列的數目有助于研發在提高關節內潤滑程度和抵消組織間不良粘連方面有所修飾的生物療法。

發明內容

本發明涉及新的重組潤滑素(lubricin)分子及其作為潤滑劑、抗粘連劑和/或關節內補充物的用途。

為了最優化表達參數和研究全部大約76-78個KEPAPTT樣序列的功能必要性，設計了能夠使得能夠合成具有不同O-連接的寡糖取代程度的重組潤滑素蛋白的潤滑素表達構建體。該設計是通過將可變數目的KEPAPTT樣序列整合進包括外顯子1-5、外顯子6的5′-和3′-側翼區以及外顯子7-12在內的“核心”cDNA構建體中而得以實現。重復插入編碼多個KEPAPTT樣序列的“合成cDNA盒”有助于生成不同大小的重組潤滑素構建體。這些研究最初集中在構建體PRG4-Lub：1(含合成“cDNA盒-1”的DNA(SEQ?ID?NO：1)，編碼4個KEPAPTT序列)。

本發明重組潤滑素蛋白與若干種天然人潤滑素同工型共有一級結構(參見US6743774、US20040072741和WO0064930)。在已表征的同工型中，編碼同工型一級結構的PRG4基因外顯子的組成各不相同。例如，PRG4基因的外顯子1-12編碼V0同工型，即全長同工型，外顯子1-4和6-12則編碼V1同工型，該同工型僅缺少由外顯子5編碼的片段。外顯子1-3和6-12編碼V2同工型，該同工型缺少由外顯子4和5編碼的片段。最后，外顯子1、3和6-12則編碼V3同工型，該同工型缺少由外顯子2、4和5編碼的片段。也可能存在其它同工型，已有報道公開了若干種相關的突變蛋白(參見US20020086824)。