[發明專利]鹿豬牛羊馬驢兔雞的PCR鑒定用引物體系

有效

• 申請號: 201210411963.1
• 申請日: 2012-10-25
• 公開（公告）號: CN102876805A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 周翠霞;楊彥鵬;黨平
• 申請（專利權）人: 蘇州市紅冠莊國藥飲片有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 昆山四方專利事務所 32212
• 代理人: 盛建德

1.一種鹿豬牛羊馬驢兔雞的PCR鑒定用引物體系，其特征在于：由下列引物對組成：

（1）對鹿12S?rRNA基因進行擴增生成鹿特異性擴增片段的引物對Ⅰ：

正向引物：5’-GCCTTCCTATTGACCCTTAATAG-3’

反向引物：5’-AGCGGCTGTAAAGTTACTTTCGT-3’；

（2）對豬12S?rRNA基因進行擴增生成豬特異性擴增片段的引物對Ⅱ：

正向引物：5’-AGCACACCTATAACGGTAGCTCA-3’

反向引物：5’-CCTAGCTATCGTGTGTCAGGATT-3’；

（3）對牛Cytb基因進行擴增生成牛特異性擴增片段的引物對Ⅲ：

正向引物：5’-CCCTCTTACTAATTCTAGCTCT-3’

反向引物：5’-GTCCGATGGTGATATATGGGTG-3’；

（4）對羊Cytb基因進行擴增生成羊特異性擴增片段的引物對Ⅳ：

正向引物：5’-CGCCATGCTACTAATTCTTGTTCT-3’

反向引物：5’-TGGAGGAAGGGTACAAGTACTAAG-3’；

（5）對馬基因進行擴增生成馬特異性擴增片段的引物對組合，該引物對組合由對馬Cytb基因進行擴增生成馬特異性擴增片段的引物對Ⅴ和對馬12S?rRNA基因進行擴增生成馬特異性擴增片段的引物對Ⅵ組成：

引物對Ⅴ：

正向引物：5’-CACAGCCCTGGTAGTCGTACA-3’

反向引物：5’-TGTCCGCCGATTCATGTTAGT-3’；

引物對Ⅵ：

正向引物：5’-CGTGTCAAAGACTAATACCAA-3’

反向引物：5’-AGCTATCGTGTAGTCAGAGGTA-3’；

（6）對驢16S?rRNA基因進行擴增生成驢特異性擴增片段的引物對Ⅶ：

正向引物：5’-TTCAAGCTCAACGTCACACATA-3’

反向引物：5’-TGTGTTGGGTTAACAATAGTCT-3’；

（7）對兔12S?rRNA基因進行擴增生成兔特異性擴增片段的引物對Ⅷ：

正向引物：5’-GCGTAAAGCGTGATTAGAATAAAC-3’

反向引物：5’-TAGCTATCGTGAGTTCGAAGAGT-3’；

（8）對雞12S?rRNA基因進行擴增生成雞特異性擴增片段的引物對Ⅸ：

正向引物：5’-ATCCATCTTAGCCTCAACGATTAA-3’

反向引物：5’-CTATTGAGCTCACTGTTGTTCTTT-3’。

2.一種鹿豬牛羊馬驢兔雞的PCR鑒定方法，其特征在于：以樣品總DNA為模板，利用所述引物對Ⅰ、引物對Ⅱ、引物對Ⅲ、引物對Ⅳ、由引物對Ⅴ和引物對Ⅵ組成的引物對組合、引物對Ⅶ、引物對Ⅷ和引物對Ⅸ分別進行PCR擴增實驗，反應結束后根據瓊脂糖凝膠電泳判定結果；所述樣品總DNA模板來自鹿、豬、牛、羊、馬、驢、兔和雞物種血液的混合，或上述各物種血液產品中的一種。

3.根據權利要求2所述的鹿豬牛羊馬驢兔雞的PCR鑒定方法，其特征在于：所述PCR擴增實驗中的特定PCR反應體系包括下列組分：雙蒸水3體積份、10×PCR反應緩沖液1體積份、2.5mM?each的dNTPs?0.8體積份、2.5U/μl的Taq酶0.2體積份、經稀釋500倍的總DNA模板1體積份、1μM正向引物2體積份和1μM反向引物2體積份。

4.根據權利要求3所述的鹿豬牛羊馬驢兔雞的PCR鑒定方法，其特征在于：所述PCR擴增實驗中的特定PCR反應體系包括下列組分：雙蒸水3μl、10×PCR反應緩沖液1μl、2.5mM?each的dNTPs?0.8μl、2.5U/μl的Taq酶0.2μl、經稀釋500倍的總DNA模板1μl、1μM正向引物2μl和1μM反向引物2μl。

5.根據權利要求2所述的鹿豬牛羊馬驢兔雞的PCR鑒定方法，其特征在于：所述PCR擴增實驗中特定PCR反應程序為：依次進行94℃下預變性5min，94℃變性45s，56℃退火45s，72℃延伸45s，進行35次循環，72℃下延伸10min，最后在4℃下保持1min后結束。