[發明專利]一種快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌的試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201210410984.1
• 申請日: 2012-10-24
• 公開（公告）號: CN102914649A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 林禮錕;盧新
• 申請（專利權）人: 廣州綠洲生化科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/544
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

技術領域

本發明涉及一種快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌的試劑盒及其檢測方法。

背景技術

金黃色葡萄球菌?(Staphyloccocus?aureus?)?是普遍存在于自然界（空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中）、對人類可產生致病性的重要食源性病原菌，隸屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），有“嗜肉菌的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌細胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸；無芽胞、鞭毛，大多數無莢膜。金黃色葡萄球菌營養要求不高，在普通培養基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37℃，最適生長PH7.4，干燥環境下可存活數周。金黃色葡萄球菌在血平板生長形成的菌落周圍有透明的溶血環。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10～15%NaCl肉湯中生長，可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產酸不產氣。甲基紅反應陽性，VP反應弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。對堿性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制其生長。金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產生的毒素和侵襲性酶。根據對食源性疾病的統計分析顯示20～25%系由金黃色葡萄球菌的腸毒素引起的。據報道新鮮食品中含有大于5×10⁴cfu/g就可以引起食品中毒。

每年因病原微生物引起的疾病近數10億例，約有170萬名兒童因食用病原微生物污染的食物引起腹瀉而死亡。近年來，我國每年由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件已上升第4位。因金黃色葡萄球菌引起的食物中毒已成為世界性的公共衛生問題。鑒于對金黃色葡萄球菌的危害認識，檢測、監控食品是否含有金黃色葡萄球菌的是至關重要的。現在檢測金黃色葡萄球菌的國標方法是GB?4789.10—2010，該方法的檢測時間長，操作繁瑣，要求專業技術人員，不適合大批量樣本的快速檢測。

目前金黃色葡萄球菌的檢測方法有微生物學方法（傳統培養法和紙片法），生物化學方法，血清學方法，免疫學方法（ELISA、免疫熒光技術），分子生物學方法（實時熒光定量PCR技術、基因測序技術、生物芯片技術）。這些方法都存在著一些限制：①檢測所需的時間長；②特異性不好；③靈敏度較差；④需要配制一定的儀器設備；⑤需要具備比較專業的人操作；⑥檢測費用高，這些檢測技術都難于在基層單位廣泛應用。對于國內外對食品安全要求不斷提高的現狀，需要開發一種快速簡單，在基層單位容易推廣的檢測技術。

發明內容

本發明的目的在于提供一種快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌的試劑盒及其檢測方法。

本發明采用的解決方案為：

一種快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌的試劑盒，包括增菌劑、免疫層析試紙及裂解劑；

所述增菌劑由如下重量份組份組成：胰蛋白胨16～24份、牛肉浸出粉8～12份、酵母浸粉6.5～9.5份、葡萄糖0.4～0.6份、氯化鈉2.5～3.5份、氯化鋰1.5～2.5份、磷酸氫二鈉0.65～0.95份、純化水1000份；?

所述裂解劑是由Triton?X-100、Tween-80組成的水溶液；

所述免疫層析試紙包括面板及與其緊密扣合的底板，面板包括吸水墊、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊，金標墊與吸水墊分別緊密連接于硝酸纖維素膜的兩端，樣品墊緊密連接于金標墊；所述金標墊上含有金黃色葡萄球菌蛋白A抗體標記膠體金探針，所述硝酸纖維素膜上載有相互分離的檢測線和質控線。

優選的，所述裂解劑，按體積百分含量計算，由如下組分組成：Triton?X-100?30～50%、Tween-80?7.5～15%，余量為水。

優選的，所述增菌劑由如下重量份組份組成：胰蛋白胨20份、牛肉浸出粉10份、酵母浸粉8份、葡萄糖0.5份、氯化鈉3份、氯化鋰2份、磷酸氫二鈉0.8份、純化水1000份。

優選的，免疫層析試紙的底板采用PVC板材料。

優選的，免疫層析試紙的吸水墊采用純植物纖維的純白濾紙材料。

優選的，免疫層析試紙的硝酸纖維素膜采用進口的135NC膜材料。

優選的，免疫層析試紙的金標墊和樣品墊采用親水的玻璃纖維材料。

優選的，檢測線由兔IgG抗體噴涂而成，質控線由羊抗雞IgG抗體噴涂而成。

一種快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌的方法，使用權利要求1～8任一項所述的試劑盒，包括以下步驟：