[發(fā)明專利]有機(jī)熒光分子-殼聚糖納米復(fù)合物一氧化氮供體的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210410372.2
• 申請(qǐng)日: 2012-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN102924756A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬錒俊;譚連江;李慧麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C08L5/08
• 分類號(hào): C08L5/08;C08B37/08;C09K11/06;G01N33/52;C01B21/24
• 代理公司: 上海科盛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225
• 代理人: 蔣亮珠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)、生物與材料的交叉領(lǐng)域，尤其是涉及一種具有釋放一氧化氮并原位實(shí)時(shí)探測(cè)其釋放功能的有機(jī)熒光分子-殼聚糖納米復(fù)合物一氧化氮供體及其制備方法。?

背景技術(shù)

一氧化氮(NO)是一種能夠被人體內(nèi)皮細(xì)胞合成的生理調(diào)節(jié)劑，廣泛的分布于全身的多種器官，是重要的生物信使分子。NO能夠有效的防止血小板的凝結(jié)和活化，抗血栓的形成，減少細(xì)菌的粘附，并有殺死癌細(xì)胞的功能。一氧化氮的缺乏會(huì)導(dǎo)致器官功能失調(diào)，引發(fā)高血壓、心臟病、呼吸系統(tǒng)疾病等。為了治療一氧化氮缺乏引發(fā)的各種疾病，人們?cè)O(shè)計(jì)并合成了很多種一氧化氮供體，其中偶氮二烯醇類親核一氧化氮供體(diazeniumdiolates)是近幾年發(fā)展起來的一種性能優(yōu)良的一氧化氮供體。這類親核一氧化氮供體一般是將含有仲胺基團(tuán)的親核化合物與一氧化氮?dú)怏w在一定的壓力條件下反應(yīng)制得，能夠在生理環(huán)境中以一定的速率自發(fā)釋放一氧化氮。在親核一氧化氮供體材料中，殼聚糖及其衍生物由于其良好的生物相容性和生物可降解性以及低細(xì)胞毒性等特性而備受關(guān)注。有研究表明，殼聚糖作為一氧化氮的載體材料在生理環(huán)境下可以穩(wěn)定地釋放一氧化氮。殼聚糖結(jié)構(gòu)上的特殊性使之與許多有機(jī)物、離子、生物分子等具有絡(luò)合、吸附和離子交換等作用。因此，可以利用不同的物質(zhì)對(duì)殼聚糖及其衍生物進(jìn)行改性，使其具備一些新的功能。?

現(xiàn)有的一氧化氮供體可以滿足釋放一氧化氮的需求，但是絕大多數(shù)無法同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)一氧化氮釋放的探測(cè)。要實(shí)現(xiàn)對(duì)所釋放一氧化氮的探測(cè)，必須同時(shí)使用熒光探針或其它檢測(cè)手段，這樣就增加了操作的難度，且不利于成本的降低。中國(guó)發(fā)明專利CN102516606報(bào)道了一種一氧化氮供體-量子點(diǎn)的納米復(fù)合物，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)一氧化氮的釋放以及對(duì)一氧化氮釋放的熒光探測(cè)。但是，量子點(diǎn)對(duì)一氧化氮的探測(cè)基于一氧化氮對(duì)量子點(diǎn)的熒光淬滅作用，其對(duì)一氧化氮的選擇性不強(qiáng)，容易受到其它對(duì)?量子點(diǎn)有熒光淬滅作用的物質(zhì)的干擾。因此，如何制備既能穩(wěn)定釋放一氧化氮，又能實(shí)現(xiàn)對(duì)一氧化氮釋放的原位、實(shí)時(shí)、高選擇性探測(cè)的一氧化氮供體是一項(xiàng)很有意義的課題，也是亟待解決的關(guān)鍵技術(shù)問題。?

目前尚未見將有機(jī)熒光分子與殼聚糖或殼聚糖衍生物相結(jié)合制備具有上述功能的納米復(fù)合物一氧化氮供體的相關(guān)專利報(bào)道。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種操作簡(jiǎn)單，成本較低，產(chǎn)物在生理環(huán)境下可以穩(wěn)定地釋放一氧化氮，并且可以原位實(shí)時(shí)探測(cè)一氧化氮的釋放，對(duì)一氧化氮的選擇性高，生物相容性好，在高血壓、心臟病、呼吸系統(tǒng)疾病、性功能障礙等的診斷和治療方面有著良好的應(yīng)用前景的有機(jī)熒光分子-殼聚糖納米復(fù)合物一氧化氮供體的制備方法。?

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：一種有機(jī)熒光分子-殼聚糖納米復(fù)合物一氧化氮供體的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：?

(1)在室溫下將一定量的殼聚糖或其衍生物溶于去離子水中，制得濃度為1-15mg/mL的殼聚糖或殼聚糖衍生物水溶液；?

(2)在室溫?cái)嚢钘l件下向步驟(1)制得的殼聚糖或殼聚糖衍生物水溶液中加入有機(jī)熒光分子溶液，有機(jī)熒光分子與殼聚糖或其衍生物的質(zhì)量比為5∶1～1∶1，攪拌1-2小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)濃縮，真空干燥后得到有機(jī)熒光分子與殼聚糖的納米復(fù)合物；?

(3)在25-45℃的高壓反應(yīng)釜中，將步驟(2)制得的有機(jī)熒光分子與殼聚糖的納米復(fù)合物加到甲醇鈉的無水甲醇溶液中，殼聚糖或殼聚糖衍生物與甲醇鈉的質(zhì)量比控制在1∶1-1∶3，將高壓反應(yīng)釜先通氮?dú)庠俪檎婵眨缓笸ㄈ胍谎趸獨(dú)怏w，維持壓力50-120psi，攪拌反應(yīng)3-8天后，用氮?dú)獯底呶捶磻?yīng)的一氧化氮?dú)怏w，將產(chǎn)物過濾，相繼用無水甲醇和乙醚洗滌，在室溫下真空干燥；?

(4)將步驟(3)制得的產(chǎn)物加入盛有二甲基甲酰胺的密閉玻璃容器中，在-5-5℃的溫度下攪拌并通氮?dú)獗Ｗo(hù)，然后加入一定量的溴代烷烴，反應(yīng)1.5-5小時(shí)后升至室溫繼續(xù)攪拌24-60小時(shí)，過濾得到的固體用乙醚洗滌，在真空烘箱中室溫干燥24小時(shí)；?

(5)在室溫下將上述產(chǎn)物與氯化銅在中性緩沖溶液中反應(yīng)，得到有機(jī)熒光分?子-殼聚糖納米復(fù)合物一氧化氮供體。?

所述的殼聚糖或其衍生物為脫乙酰度為40％-60％的水溶性殼聚糖、羧甲基殼聚糖、殼聚糖季銨鹽中的一種或多種，粘均分子量為2-40萬。?

所述的有機(jī)熒光分子為含有喹啉基團(tuán)的羅丹明衍生物。?

所述的有機(jī)熒光分子優(yōu)選以下物質(zhì)，分子式分別為：?