[發(fā)明專利]芋螺毒素的生物學(xué)制備方法及其產(chǎn)品和用途

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210410292.7
• 申請(qǐng)日: 2012-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN102876683A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張志芳;李軼女;易詠竹;劉興健;鄭學(xué)星;邊大勇;王國增;江峰;鐘魯龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12N15/866;C12N5/10;C07K14/435;A61K38/17;A61P25/04;A61P25/00;A61P25/30
• 代理公司: 北京市德權(quán)律師事務(wù)所 11302
• 代理人: 余光軍

1.優(yōu)化的芋螺毒素αACT1基因，其特征在于：其核苷酸序列為SEQID?No.2所示。

2.含有權(quán)利要求1所述優(yōu)化的芋螺毒素αACT1基因的重組表達(dá)載體；優(yōu)選的，所述的重組表達(dá)載體是重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移表達(dá)載體。

3.含有權(quán)利要求2所述表達(dá)載體的宿主細(xì)胞；優(yōu)選的，所述的宿主細(xì)胞是昆蟲宿主或昆蟲細(xì)胞；更優(yōu)選的，所述的昆蟲宿主是家蠶，所述的昆蟲細(xì)胞是家蠶細(xì)胞。

4.權(quán)利要求1所述的芋螺毒素αACT1基因在制備芋螺毒素中的用途。

5.一種芋螺毒素的生物學(xué)制備方法，其特征在于，包括：(1)將芋螺毒素基因克隆到桿狀病毒運(yùn)載載體的表達(dá)盒中，構(gòu)建得到重組轉(zhuǎn)移表達(dá)載體；(2)將所構(gòu)建的重組轉(zhuǎn)移表達(dá)載體與桿狀病毒DNA共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，獲得重組桿狀病毒；(3)用重組桿狀病毒感染昆蟲宿主或昆蟲細(xì)胞；培養(yǎng)被感染的昆蟲宿主，收獲并純化所表達(dá)的產(chǎn)物，即得。

6.按照權(quán)利要求5所述的生物學(xué)制備方法，其特征在于：所述的芋螺毒素是α-芋螺毒素、μ-芋螺毒素、ω-芋螺毒素或δ-芋螺毒素中的任意一種；優(yōu)選為α-芋螺毒素；更優(yōu)選為SEQ?ID?NO：1所示的原始的芋螺毒素αACT基因或SEQ?ID?NO：2所示的優(yōu)化后的芋螺毒素基因，最優(yōu)選為SEQID?NO：2所示的優(yōu)化后的芋螺毒素αACT1基因。

7.按照權(quán)利要求5所述的生物學(xué)制備方法，其特征在于：所述的桿狀病毒運(yùn)載載體的表達(dá)盒包括啟動(dòng)子和增強(qiáng)子，所述的啟動(dòng)子優(yōu)選為多角體蛋白啟動(dòng)子、p10啟動(dòng)子或ie-1啟動(dòng)子中的任意一種；

所述的桿狀病毒選自BmNPV、AcMNPV、ApNPV、HaNPV、HzNPV、LdMNPV、MbMNPV、OpMNPV、SIMNPV、SeMNPV或SpltNPV中的任意一種；優(yōu)選的，所述桿狀病毒為家蠶桿狀病毒BmNPV，進(jìn)一步優(yōu)選為家蠶桿狀病毒親本株Bm-NPV-ZJ8；

所述的昆蟲宿主選自家蠶(Bombyx?mori)、野蠶(Bombyxmandarina)、蓖麻蠶(Philosamia?cynthia?ricim)、樟蠶(Dictyoplocajapanica)、樗蠶(Philosamia?cynthia?pryeri)、柞蠶(Antheraea?pernyi)、日本柞蠶(Antheraea?yamamai)、野天蠶(Antheraea?polyphymus)、苜蓿尺蠖(Atographa?califorica)、茶尺蠖(Ectropis?obliqua)、甘蘭夜蛾(Mamestra?brassicae)、斜紋夜蛾(Spodoptera?littoralis)、秋粘蟲(Spodoptera?frugiperda)、粉紋夜蛾(Trichoplusia?ni)、行軍蟲(Thaumetopoea?wilkinsoni)、棉鈴蟲(Heliothis?armigera)、美國棉鈴蟲(Heliothis?zea)、煙青蟲(Heliothis?assulta)、煙草夜蛾(Heliothis?virescens)、東方粘蟲(Pseudaletia?separata)或舞毒蛾(Lymantria?dispar)；優(yōu)選的，所述桿狀病毒的昆蟲宿主為家蠶；

所述的感染是將重組桿狀病毒通過口食來感染1-5齡的昆蟲幼蟲或蛹體，或透過表皮來感染1-5齡的昆蟲幼蟲或蛹體；優(yōu)選的，所述的感染是將重組家蠶桿狀病毒感染家蠶細(xì)胞，或?qū)⒅亟M家蠶桿狀病毒穿刺接種1-5齡的家蠶幼蟲或蛹體；其中，所述的蛹體優(yōu)選為1-2天的早期嫩蛹。

8.由權(quán)利要求6或7述生物學(xué)制備方法制備得到的芋螺毒素。

9.一種鎮(zhèn)痛、神經(jīng)修復(fù)或戒斷毒癮的藥物組合物，其特征在于：包括有效量的權(quán)利要求8所述的芋螺毒素和藥學(xué)上可接受的輔料。

10.一種鎮(zhèn)痛的注射或口服制劑，其特征在于：包括治療上有效量的權(quán)利要求8所述的芋螺毒素和終濃度為25-35％的脂肪酸。