[發(fā)明專利]一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法

有效

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• 申請日: 2012-10-19
• 公開（公告）號: CN103130816B
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石振拓
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北諾克特藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07D493/22
• 分類號: C07D493/22;C08B37/00;A61K36/16
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)物質(zhì)或藥品的制造方法，具體涉及以銀杏葉為原料，經(jīng)過提取分離純化，得到多種活性物質(zhì)的方法。

背景技術(shù)

2億年前銀杏科植物廣泛存在于亞、非、歐、南美洲和澳洲。幾乎遍布于整個地球表面。由于第三紀(jì)和第四紀(jì)時期地球發(fā)生巨變，大部分銀杏科植物滅絕，僅有銀杏一種幸存，因而被稱為“活化石”植物。銀杏是我國特有的珍貴樹種，尤其長江以南和臺灣省，占世界銀杏資源總量的70％以上。隨著銀杏葉中有效成分的藥用、保健等綜合價值的挖掘和開發(fā)，對銀杏葉的系統(tǒng)研究在世界范圍內(nèi)掀起了高潮，其銀杏葉化學(xué)成分的藥用機(jī)制和臨床運(yùn)用成為研究的熱點(diǎn)。

中國很早就意識到了銀杏的藥用價值，明代李時珍在《本草綱目》中提到，銀杏“人肺經(jīng)，益肺氣，定喘咳，縮小便”。20世紀(jì)60年代，德國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)銀杏黃酮能防治心腦血管疾病和降血脂。20世紀(jì)70年代，德國醫(yī)學(xué)媒體報道，銀杏葉提取物能增加中樞和外周血管血流量，可用于心、腦及外周血管缺血性疾病。20世紀(jì)80年代，法國科學(xué)家Brapuat發(fā)現(xiàn)了銀杏葉的內(nèi)酯成分有很強(qiáng)的拮抗血小板活化因子(PAF)的作用，隨后銀杏葉制劑作為第一個進(jìn)入臨床的PAF拮抗劑進(jìn)行了三期臨床觀察，銀杏葉制劑的研究和開發(fā)進(jìn)入了一個新的領(lǐng)域。1991年，美國哈佛大學(xué)的學(xué)者因發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯B的分子結(jié)構(gòu)而榮獲諾貝爾獎。至今在世界上同一種研究中，唯有銀杏兩次獲諾貝爾獎。隨后，銀杏葉提取物的用途得到更深入、廣泛的研究，如用來治療慢性腎功能衰竭、冠心病、突發(fā)性耳聾、胃黏膜損傷、精神分裂癥、阿爾茨海默癥、腦血栓等病癥，并可抗腫瘤。更進(jìn)一步的研究也表明，銀杏內(nèi)酯B在臨床上用于中風(fēng)、器官移植排斥反應(yīng)、休克等的治療和血液透析，其效果明顯優(yōu)于銀杏內(nèi)酯混合物，于是國際市場又出現(xiàn)了銀杏葉的純化提取物B。

銀杏葉中有效成分的制備工藝主要有以下類型：1、水蒸汽蒸餾法：將銀杏葉干燥、粉碎后，100～120℃水蒸餾，蒸餾液冷卻后，用非極性大孔樹脂吸附、濃縮，然后用乙醇洗脫，蒸干即得到粉狀結(jié)晶。該方法提取率很低；2、有機(jī)溶液萃取法：其提取工藝的專利也較多，可歸納為兩種形式：一種是制備銀杏葉粗提物，這類方法是把銀杏葉干燥、粉碎后用有機(jī)溶劑(例如乙醇或丙酮、石油醚等)浸泡、萃取、過濾，濾液中的溶劑用減壓蒸餾除去后，得銀杏浸膏。這種方法的制備簡單，產(chǎn)品的收率高(約12％～14％)，但產(chǎn)品中雜質(zhì)含量較高，通常呈棕黑色。另一種是制備銀杏葉精提物，這種方法通常在粗提物制備基礎(chǔ)上，進(jìn)一步精制，常用的精制方法有：液-液萃取(例如用二氯甲烷、氯仿或苯脫脂)，沉淀法(NH₄OH或PbAc等沉淀劑)以及硅藻土或硅膠吸附法。再通過干燥、過濾、減壓濃縮除去溶劑后，即可得到精提物。一般為黃褐色粉末，收率為1～3％，該類方法耗費(fèi)大量有機(jī)試劑，且得到的產(chǎn)品純度不高；3、超臨界流體萃取法：近十年來，用該技術(shù)提取天然植物中的藥用有效成分也越來越廣泛。它和上述的提取工藝相比較，具有提取率高，無溶劑殘留毒性、天然植物中活性成分和熱不穩(wěn)定性成分不易被分解破壞而保持其天然特征等優(yōu)點(diǎn)，但是隨著超臨界流體萃取法的深入研究，該技術(shù)的不足在于不能得到需要分離的單組分純品，對于銀杏內(nèi)酯A、B、C只是粗分離。

目前，還有許多關(guān)于采用柱分離提取、純化、制備銀杏提取物的方法，但這些方法基本上都耗大量有機(jī)溶劑，引起環(huán)境污染；或運(yùn)用較為復(fù)雜的分離技術(shù)難以放大生產(chǎn)；或取效率不高，原料利用率較低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法，采用強(qiáng)極性或極性大孔吸附樹脂分離，解決現(xiàn)有制備銀杏提取物銀杏酸偏高的問題，并解決現(xiàn)有提取及制備銀杏活性物質(zhì)耗費(fèi)大量有機(jī)溶劑，引起環(huán)境污染；或運(yùn)用較為復(fù)雜的分離技術(shù)難以放大生產(chǎn)；或取效率不高，原料利用率較低等問題。并能同時得到銀杏多糖、銀杏提取物、銀杏總黃酮、銀杏總內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、B、C單體等多種活性物質(zhì)。

本發(fā)明的一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法，包括：

(1)原料前處理步驟；銀杏葉干品原料粉碎后，加入含有纖維素酶及果膠酶的水溶液進(jìn)行破壁反應(yīng)，烘干得到提取原料；

(2)提取步驟；在步驟(1)得到的提取原料，50～80％乙醇提取，60～90℃下提取，料液比1∶8～1∶20，提取2～4次，合并后得到提取液；

(3)多糖沉淀步驟；沉淀分離步驟；將步驟(3)中得到的提取液濃縮后，加入絮凝劑進(jìn)行沉淀反應(yīng)，過濾得到沉淀物銀杏多糖；過濾得到的上清液為沉淀分離液；

(4)大孔樹脂分離步驟；將步驟(3)中得到的沉淀分離液，經(jīng)過極性或強(qiáng)極性大孔樹脂分離，得到銀杏提取物；