[發(fā)明專利]一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210406959.6
• 申請日: 2012-10-19
• 公開（公告）號: CN103130816B
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石振拓
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北諾克特藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07D493/22
• 分類號: C07D493/22;C08B37/00;A61K36/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法，包括：

(1)原料前處理步驟：銀杏葉干品原料粉碎后，加入含有纖維素酶及果膠酶的水溶液進(jìn)行破壁反應(yīng)，烘干得到提取原料；

(2)提取步驟：在步驟(1)得到的提取原料，50～80％乙醇提取，60～90℃下提取，料液比1∶8～1∶20，提取2～4次，合并后得到提取液；

(3)多糖沉淀步驟：沉淀分離步驟；將步驟(3)中得到的提取液濃縮后，加入絮凝劑進(jìn)行沉淀反應(yīng)，過濾得到沉淀物銀杏多糖；過濾得到的上清液為沉淀分離液；

(4)大孔樹脂分離步驟：將步驟(3)中得到的沉淀分離液，經(jīng)過極性或強(qiáng)極性大孔樹脂分離，得到銀杏提取物；

(5)硅膠干柱分離步驟：將步驟(4)中得到的銀杏提取物濕法上樣于硅膠干柱上，銀杏提取物與硅膠的質(zhì)量比為1/50～1/100，在常壓下利用壓力差以展開劑下行展開，分別獲得銀杏總黃酮與銀杏總內(nèi)酯；展開劑為甲醇與正己烷的混合液；

(6)反相層析精制步驟：對步驟(5)中得到的銀杏總內(nèi)酯，以C18填料為固定相，以甲醇與水的混合液為流動(dòng)相，進(jìn)行中低壓反相層析，分別收集富含銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的正組分；

(7)結(jié)晶步驟：分別將反相層析的三個(gè)正組分減壓蒸餾至干得到固形物，各加入濃度為60％～80％的甲醇水溶液，40℃～60℃下充分溶解后，趁熱過濾后，冷凍結(jié)晶，分別獲得純度大于98％的銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C。

2.如權(quán)利要求1所述的一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法，其特征在于：所述原料前處理步驟中，所述纖維素酶及果膠酶的水溶液為：水溶液的體積與原料的質(zhì)量比為0.5～2∶1(體積質(zhì)量比)，纖維素酶的量與原料的質(zhì)量比為0.5～3∶1000(質(zhì)量比)，果膠酶的質(zhì)量與原料的質(zhì)量比為0.5～2∶1000(質(zhì)量比)；所述破壁反應(yīng)為：反應(yīng)溫度30～60℃，反應(yīng)時(shí)間1～3小時(shí)。

3.如權(quán)利要求1所述的一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法，其特征在于：所述多糖沉淀步驟中，所述提取液濃縮為：將提取液濃縮至與銀杏葉干品原料的體積質(zhì)量比為2～5∶1(L/kg)；所述絮凝劑劑為：殼聚糖、聚苯烯酰胺、聚苯烯酸鈉、聚苯烯酸鈣中的一種；所述加入絮凝劑進(jìn)行沉淀反應(yīng)，過濾得到沉淀物銀杏多糖，其過程為：在濃縮液中加入絮凝劑，所加入絮凝劑與濃縮液的質(zhì)量體積比為0.05～2∶100(kg/L)，攪拌10～30min后，常溫靜置6～12小時(shí)，過濾得到沉淀物干燥后得到銀杏多糖。

4.如權(quán)利要求1所述的一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法，其特征在于：所述大孔樹脂分離步驟中，所述極性或強(qiáng)極性大孔樹脂為：ADS-2、ADS-7、HPD-826、HPD-600中的一種；所述經(jīng)過極性或強(qiáng)極性大孔樹脂分離，其過程為：將沉淀分離液上樣到大孔樹脂上，用純水或5％～15％的乙醇水溶液洗脫2～4柱體積，棄去洗脫液，再用40％～60％的乙醇水溶液洗脫2～4柱體積，收集洗脫液，干燥得到銀杏提取物。

5.如權(quán)利要求1所述的一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法，其特征在于：所述硅膠干柱分離步驟中，所述硅膠干柱為：填裝有硅膠基填料、高徑比5∶1～20∶1的裝置，硅膠基填料由硅膠和硅藻土組成，硅藻土與硅膠的質(zhì)量百分比為10％～20％；硅膠粒徑為30μm～80μm，硅膠活性為II～I(xiàn)II級；所述硅膠干柱的填裝過程為：將硅膠基填料與等體積的有機(jī)溶劑混合成為懸濁液，倒入塞有玻璃棉和兩通活塞的空心PVC柱，硅膠基填料不斷沉積，溶劑經(jīng)過玻璃棉流出，控制溶劑的流出速度，使硅膠基填料表面始終被溶劑覆蓋，直到填裝到所需要高度；所述有機(jī)溶劑為正己烷、石油醚、正戊烷中的一種。

6.如權(quán)利要求1所述的一種從銀杏葉中制備多種活性物質(zhì)的方法，其特征在于：所述硅膠干柱分離步驟中，所述展開劑的體積比為：甲醇∶正己烷＝90∶10～98∶2；所述下行展開的過程為：將展開劑從硅膠干柱頂加入，在常壓下利用壓力差下行展開，當(dāng)展開劑流至硅膠干柱底部時(shí)，停止加入展開劑；分別將富含銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯的硅膠干柱段切割刮出，用三氯甲烷振蕩洗脫10～20分鐘，重復(fù)洗脫2～3次，將所獲的三氯甲烷溶液減壓蒸干，分別得到的固形物即為銀杏總黃酮和銀杏總內(nèi)酯；所述富含銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯的硅膠干柱段是參照相同展開劑條件下硅膠薄層實(shí)驗(yàn)得到的兩者的比移值Rf確定。