[發明專利]一種制備高光學純度的醇類化合物的方法

在審

• 申請號: 201210404994.4
• 申請日: 2012-10-23
• 公開（公告）號: CN102876733A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 洪浩;鄭長勝;高峰;李雁飛;呂麗慧;呂彤;李艷君
• 申請（專利權）人: 凱萊英醫藥集團（天津）股份有限公司;凱萊英生命科學技術（天津）有限公司;天津凱萊英制藥有限公司;凱萊英醫藥化學（阜新）技術有限公司;吉林凱萊英醫藥化學有限公司
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22
• 代理公司: 天津天麓律師事務所 12212
• 代理人: 盧楓

（一）技術領域：

本發明涉及兩種酮還原酶對酮的不對稱還原應用于制備高光學純度的醇類化合物的方法。

（二）背景技術：

不對稱生物催化由于其經濟效益高，同時由于酶的專一特性，使得這種方法具有高的立體、化學及光學專一性的優點，因此已經成為工業上合成化學品，醫藥及農藥中間體的重要方法。其中，酮類化合物生成手性醇化合物是合成很多精細化工品的必要步驟，化學拆分常用酒石酸等拆分劑進行多次拆分，所得產物化學純度可達到99%以上，但其缺點就是拆分收率極低，只有不到10%；另外有時化學拆分法還使用價格昂貴的手性拆分劑，大大地增加了生產成本；另外所采用的化學試劑操作較為復雜，且后處理不利用環境保護。不對稱生物催化還原方法的發展正可以解決這些問題，酮還原酶可以從酮化合物還原生成手性醇化合物，同時需要輔助因子，較為普遍的是NADH或NADPH。

現階段，制備手性醇化合物的方法有很多，涉及到生物的方法主要有生物催化拆分和生物催化不對稱還原，其中用于不對稱還原的生物催化劑又包括微生物全細胞和氧化還原酶。酶法還原具有比全細胞催化產物選擇性更高，反應易處理等優點。

（三）發明內容：

本發明的目的在于提供一種制備高光學純度的醇類化合物的方法，它是兩種酮還原酶對酮類化合物的不對稱還原的應用，特別是得到高光學純度的手性醇產品，選用已經在市場上商業化的原料或者容易制備的酮類化合物為初始原料，其中R1、R2分別為C1-C8直鏈烷基、C5-C10環烷基、C5-C10芳基或吡啶基團，所述的芳基或吡啶基團未被取代或被選自以下的一個或多個基團所取代：鹵素、烷氧基、C1-C5直鏈烷基；將磷酸鹽緩沖液、NAD⁺、甲酸銨和酮還原酶加入到主原料酮類化合物的體系中，恒溫條件下反應，得到較高ee值的產品，本發明極大地簡化了后處理純化操作，工藝條件穩定，操作簡單，適用于規模化生產，為制備高光學純度的醇類化合物提供了一種新的思路和方法。

本發明的技術方案：一種制備高光學純度的醇類化合物的方法，其特征在于具體制備步驟如下：

（1）投料：向反應釜中加入主原料酮類化合物，磷酸鹽緩沖液100mmol/L，pH=6.0~7.0，使酮類化合物均勻分散于磷酸鹽緩沖液中；其中，R₁、R₂分別為C₁-C₈直鏈烷基、C₅-C₁₀環烷基、C₅-C₁₀芳基或吡啶基團，所述的芳基或吡啶基團未被取代或被選自以下的一個或多個基團所取代：鹵素、烷氧基、C₁-C₅直鏈烷基；酮類化合物與磷酸鹽緩沖液的用量比為1g/20～100mL；

（2）加酮還原酶：向反應釜中加入輔酶NAD⁺、甲酸銨、酮還原酶主酶和甲酸脫氫酶FDH，體系pH=6.0~7.0；其中，甲酸脫氫酶FDH為來源于Candida?boidinii的甲酸脫氫酶，酮類化合物與輔酶NAD⁺的用量比為1/0.001～0.01g；酮類化合物與甲酸銨的摩爾比為1:1～5eq；酮類化合物與酮還原酶主酶的用量比為1g/0.05～0.5g；酮類化合物與甲酸脫氫酶FDH的用量比為1g/0.001～0.01g；

（3）反應：體系于20～40℃攪拌保溫反應24～72h；

（4）后處理：體系用硅藻土過濾，有機溶劑萃取，靜置分液，有機相經干燥，過濾，濃縮得到粗品，再經柱層析純化得到純度較高的產品，純度95.0～98.0%，收率52.3～98.0％，ee值93.6～99.5%，MS(M+H)₊=?123.07～334.1；其中酮類化合物與有機溶劑的用量比為1g/20～80mL；酮類化合物與硅藻土的用量比為1g/10～50g；酮類化合物與柱層析純化中的硅膠的用量比為1g/5～20g，柱層析純化中的洗脫液為乙酸乙酯/石油醚=1:20，洗脫液用量為1g/20～80mL。

上述所述步驟（1）中酮類化合物與磷酸鹽緩沖液的用量比為1g/30～80mL。

上述所述步驟（2）中，酮類化合物與輔酶NAD⁺的用量比為1/0.003～0.01g；酮類化合物與甲酸銨的摩爾比為1:1～3eq；酮類化合物與酮還原酶主酶的用量比為1g/0.05～0.3g；酮類化合物與甲酸脫氫酶FDH的用量比為1g/0.003～0.01g。