[發(fā)明專利]雙束激光質(zhì)譜法原位檢測(cè)動(dòng)物組織中藥物分子的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210398007.4
• 申請(qǐng)日: 2012-10-18
• 公開（公告）號(hào): CN102879456A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡勇軍;王紅磊;楊晴;官凱文;李衛(wèi)星
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/64
• 分類號(hào): G01N27/64
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種應(yīng)用雙束激光質(zhì)譜法原位檢測(cè)動(dòng)物組織中藥物分子的方法，其特征在于包括以下操作步驟：

（1）將藥物分子溶液加到離體腫瘤組織上，使藥物分子溶液在離體腫瘤組織中充分?jǐn)U散；

（2）將經(jīng)過(guò)步驟（1）處理的離體腫瘤組織進(jìn)行冷凍，用包埋劑將離體腫瘤組織包埋后，用冷凍切片機(jī)進(jìn)行切片，得到離體腫瘤組織切片；

（3）對(duì)承載基底石墨棒進(jìn)行清洗處理，將步驟（2）處理所得離體腫瘤組織切片放在已處理的石墨棒上，把石墨棒固定在雙束激光質(zhì)譜儀的進(jìn)樣桿上，經(jīng)進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)入雙束激光質(zhì)譜儀的電離室中進(jìn)行檢測(cè)；

（4）開啟雙束激光質(zhì)譜儀，雙束激光質(zhì)譜儀中的兩臺(tái)固體激光器分別依次發(fā)射脈沖激光，發(fā)射的第一束脈沖激光為解析激光，解析激光聚焦后進(jìn)入電離室中并且照射在石墨棒上的離體腫瘤組織切片上，經(jīng)過(guò)18～30μs延遲，再發(fā)射第二束脈沖激光，第二束脈沖激光經(jīng)過(guò)氣體池三倍頻后轉(zhuǎn)化為真空紫外激光，在氣體池出光口用平凸鏡聚焦分離第二束脈沖激光和真空紫外激光；真空紫外激光聚焦后以平行于石墨棒的方向進(jìn)入電離室中并且與第一束脈沖激光實(shí)現(xiàn)交叉，再對(duì)第一束脈沖激光氣化-解析后產(chǎn)生的氣羽進(jìn)行電離，電離的離子經(jīng)過(guò)飛行管飛行，被微通道板檢測(cè)，再通過(guò)數(shù)據(jù)采集裝置顯示及采集，最后在電腦上進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用雙束激光質(zhì)譜法原位檢測(cè)動(dòng)物組織中藥物分子的方法，其特征在于：所述步驟（1）是在無(wú)菌條件下進(jìn)行操作的；步驟（1）所述離體腫瘤組織為被Hela細(xì)胞感染的老鼠的皮下離體腫瘤組織；所述離體腫瘤組織的大小為15mm×5mm×4mm；所述藥物分子溶液的濃度為1×10^-4mol/L，其用量為10～100μl；所述充分?jǐn)U散的時(shí)間是10～20min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用雙束激光質(zhì)譜法原位檢測(cè)動(dòng)物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（1）所述藥物分子溶液是亞甲基藍(lán)溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用雙束激光質(zhì)譜法原位檢測(cè)動(dòng)物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（2）所述進(jìn)行冷凍是先將經(jīng)過(guò)步驟（1）處理的離體腫瘤組織投入用干冰冷卻的異戊烷中15～20s，再放入-80℃的冰箱里冷凍保存；所述包埋劑是OCT冰凍切片包埋劑；所述冷凍切片機(jī)是在-19～-24℃的環(huán)境下工作，冷凍切片機(jī)工作前提前開機(jī)1.5～2.0小時(shí)；所述切片的厚度為200～400μm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用雙束激光質(zhì)譜法原位檢測(cè)動(dòng)物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（3）所述石墨的純度為99.999%；所述清洗處理是將石墨分別在乙醇和超純水中進(jìn)行超聲清洗，清洗是在20～50KHz下處理20～40min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用雙束激光質(zhì)譜法原位檢測(cè)動(dòng)物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（4）所述第一束脈沖激光的波長(zhǎng)為1064nm；所述第二束脈沖激光出固體激光器時(shí)的波長(zhǎng)為355nm，經(jīng)過(guò)氣體池三倍頻后轉(zhuǎn)化為真空紫外激光時(shí)的波長(zhǎng)為118nm；

所述飛行管長(zhǎng)度為1.5m；

所述氣體池為30cm高，底部直徑7cm的圓柱型金屬管；所述氣體池中的配氣為體積比1:10的氙氣和氬氣混合氣體；所述氣體池中的氣壓為200torr；

所述平凸鏡為MgF₂平凸透鏡，其凸面對(duì)著氣體池，斜度為8°，直徑25.4mm，焦距75mm；

所述飛行管和真空設(shè)備中的真空度為1×10^-6～1×10^-5pa；

所述數(shù)據(jù)采集裝置是采用安捷倫的示波器，采集的平均次數(shù)為512次；

所述電腦是利用Origin軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用雙束激光質(zhì)譜法原位檢測(cè)動(dòng)物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（4）所述實(shí)現(xiàn)交叉是實(shí)現(xiàn)垂直交叉。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用雙束激光質(zhì)譜法原位檢測(cè)動(dòng)物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（4）所述固體激光器發(fā)射脈沖激光的觸發(fā)、延遲時(shí)間的設(shè)置和數(shù)據(jù)采集均是由數(shù)字延時(shí)發(fā)生器來(lái)控制的。

9.一種實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述方法的雙束激光質(zhì)譜儀，其特征在于：所述雙束激光質(zhì)譜儀包括數(shù)字延時(shí)發(fā)生器、進(jìn)樣系統(tǒng)、固體激光器、真空系統(tǒng)、氣體池、平凸鏡、數(shù)據(jù)采集裝置和數(shù)據(jù)處理裝置；所述真空系統(tǒng)包括電離室、飛行管和微通道板，飛行管的一端連接著電離室，另一端設(shè)置微通道板微通道板；所述固體激光器為兩臺(tái)，分別置于真空系統(tǒng)旁邊，其中一臺(tái)固體激光器與電離室之間設(shè)置氣體池，在氣體池靠近電離室的一側(cè)設(shè)置平凸鏡；所述數(shù)字延時(shí)發(fā)生器、固體激光器、微通道板、數(shù)據(jù)采集裝置和數(shù)據(jù)處理裝置依次電氣連接。