[發明專利]雙束激光質譜法原位檢測動物組織中藥物分子的方法

無效

• 申請號: 201210398007.4
• 申請日: 2012-10-18
• 公開（公告）號: CN102879456A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 胡勇軍;王紅磊;楊晴;官凱文;李衛星
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種應用雙束激光質譜法原位檢測動物組織中藥物分子的方法，其特征在于包括以下操作步驟：

（1）將藥物分子溶液加到離體腫瘤組織上，使藥物分子溶液在離體腫瘤組織中充分擴散；

（2）將經過步驟（1）處理的離體腫瘤組織進行冷凍，用包埋劑將離體腫瘤組織包埋后，用冷凍切片機進行切片，得到離體腫瘤組織切片；

（3）對承載基底石墨棒進行清洗處理，將步驟（2）處理所得離體腫瘤組織切片放在已處理的石墨棒上，把石墨棒固定在雙束激光質譜儀的進樣桿上，經進樣系統進入雙束激光質譜儀的電離室中進行檢測；

（4）開啟雙束激光質譜儀，雙束激光質譜儀中的兩臺固體激光器分別依次發射脈沖激光，發射的第一束脈沖激光為解析激光，解析激光聚焦后進入電離室中并且照射在石墨棒上的離體腫瘤組織切片上，經過18～30μs延遲，再發射第二束脈沖激光，第二束脈沖激光經過氣體池三倍頻后轉化為真空紫外激光，在氣體池出光口用平凸鏡聚焦分離第二束脈沖激光和真空紫外激光；真空紫外激光聚焦后以平行于石墨棒的方向進入電離室中并且與第一束脈沖激光實現交叉，再對第一束脈沖激光氣化-解析后產生的氣羽進行電離，電離的離子經過飛行管飛行，被微通道板檢測，再通過數據采集裝置顯示及采集，最后在電腦上進行數據處理。

2.根據權利要求1所述的一種應用雙束激光質譜法原位檢測動物組織中藥物分子的方法，其特征在于：所述步驟（1）是在無菌條件下進行操作的；步驟（1）所述離體腫瘤組織為被Hela細胞感染的老鼠的皮下離體腫瘤組織；所述離體腫瘤組織的大小為15mm×5mm×4mm；所述藥物分子溶液的濃度為1×10^-4mol/L，其用量為10～100μl；所述充分擴散的時間是10～20min。

3.根據權利要求1所述的一種應用雙束激光質譜法原位檢測動物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（1）所述藥物分子溶液是亞甲基藍溶液。

4.根據權利要求1所述的一種應用雙束激光質譜法原位檢測動物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（2）所述進行冷凍是先將經過步驟（1）處理的離體腫瘤組織投入用干冰冷卻的異戊烷中15～20s，再放入-80℃的冰箱里冷凍保存；所述包埋劑是OCT冰凍切片包埋劑；所述冷凍切片機是在-19～-24℃的環境下工作，冷凍切片機工作前提前開機1.5～2.0小時；所述切片的厚度為200～400μm。

5.根據權利要求1所述的一種應用雙束激光質譜法原位檢測動物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（3）所述石墨的純度為99.999%；所述清洗處理是將石墨分別在乙醇和超純水中進行超聲清洗，清洗是在20～50KHz下處理20～40min。

6.根據權利要求1所述的一種應用雙束激光質譜法原位檢測動物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（4）所述第一束脈沖激光的波長為1064nm；所述第二束脈沖激光出固體激光器時的波長為355nm，經過氣體池三倍頻后轉化為真空紫外激光時的波長為118nm；

所述飛行管長度為1.5m；

所述氣體池為30cm高，底部直徑7cm的圓柱型金屬管；所述氣體池中的配氣為體積比1:10的氙氣和氬氣混合氣體；所述氣體池中的氣壓為200torr；

所述平凸鏡為MgF₂平凸透鏡，其凸面對著氣體池，斜度為8°，直徑25.4mm，焦距75mm；

所述飛行管和真空設備中的真空度為1×10^-6～1×10^-5pa；

所述數據采集裝置是采用安捷倫的示波器，采集的平均次數為512次；

所述電腦是利用Origin軟件進行數據處理。

7.根據權利要求1所述的一種應用雙束激光質譜法原位檢測動物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（4）所述實現交叉是實現垂直交叉。

8.根據權利要求1所述的一種應用雙束激光質譜法原位檢測動物組織中藥物分子的方法，其特征在于：步驟（4）所述固體激光器發射脈沖激光的觸發、延遲時間的設置和數據采集均是由數字延時發生器來控制的。

9.一種實現權利要求1～8任一項所述方法的雙束激光質譜儀，其特征在于：所述雙束激光質譜儀包括數字延時發生器、進樣系統、固體激光器、真空系統、氣體池、平凸鏡、數據采集裝置和數據處理裝置；所述真空系統包括電離室、飛行管和微通道板，飛行管的一端連接著電離室，另一端設置微通道板微通道板；所述固體激光器為兩臺，分別置于真空系統旁邊，其中一臺固體激光器與電離室之間設置氣體池，在氣體池靠近電離室的一側設置平凸鏡；所述數字延時發生器、固體激光器、微通道板、數據采集裝置和數據處理裝置依次電氣連接。