[發明專利]血清腫瘤標志物檢測的微型化磁通門生物傳感器制作方法

有效

• 申請號: 201210397950.3
• 申請日: 2012-10-18
• 公開（公告）號: CN102935996A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 周勇;雷沖;雷劍
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: B81C1/00
• 分類號: B81C1/00;G01N27/72
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

1.一種血清腫瘤標志物檢測的微型化磁通門生物傳感器制作方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）采用MEMS工藝在玻璃基片上制作微型化磁通門傳感器；

（2）在玻璃基片上濺射Cr/Au薄膜，然后甩光刻膠、曝光、顯影、刻蝕Cr/Au膜、去膠，使Au膜暴露在外面；

（3）Au膜上生物敏感膜的制備：生物敏感膜為一層納米級厚度的自組裝膜，自組裝膜為11-巰基十一烷酸，然后經EDC+NHS活化形成的；

（4）腫瘤標志物單克隆抗體的固定：將腫瘤標志物單克隆抗體溶液滴入Au膜上面，放入冰箱過夜；然后用PBS溶液清洗、BSA溶液封閉，最后用PBS溶液清洗、室溫干燥；

（5）抗原點樣：將抗原溶液滴入Au膜上面，培育，然后用PBS溶液清洗，室溫下干燥；

（6）生物素化抗體固定：將生物素化抗體溶液滴入Au膜上面，室溫培育，然后用PBS溶液清洗，室溫下干燥；

（7）磁性標簽固定：將磁性標簽滴入Au膜上面，室溫下培育，然后用PBS溶液清洗，室溫干燥。

2.根據權利要求1所述的血清腫瘤標志物檢測的微型化磁通門生物傳感器制作方法，其特征在于，步驟（1）中，所述微型化磁通門傳感器的磁芯為NiFe薄膜、非晶或納米晶軟磁帶材材料，并采用MEMS工藝進行加工。

3.根據權利要求1所述的血清腫瘤標志物檢測的微型化磁通門生物傳感器制作方法，其特征在于，步驟（2）中，所述Cr/Au薄膜，其厚度為100-500nm。

4.根據權利要求1所述的血清腫瘤標志物檢測的微型化磁通門生物傳感器制作方法，其特征在于，步驟（3）中，所述Au膜上生物敏感膜的制備，具體如下：

●Au清洗，用1M/L?NaOH水溶液清洗10分鐘，1M/L?HCI水溶液清洗10分鐘，水、無水乙醇清洗2次，干燥，臭氧紫外殺菌；

●用10-30mM11-巰基十一烷酸無水乙醇溶液浸泡，室溫3小時，無水乙醇清洗2次，N2氣干燥；

●EDC+NHS活化，用PH=7.4的PBS溶液溶解EDC和NHS，其濃度分別為0.2M/L和50mM/L，然后取等體積的EDC和NHS溶液混合，室溫下活化40分鐘；

●用PH=7.4的PBS溶液清洗樣品2-5次，室溫干燥。

5.根據權利要求1所述的血清腫瘤標志物檢測的微型化磁通門生物傳感器制作方法，其特征在于，步驟（4），所述腫瘤標志物單克隆抗體的固定，具體如下

●腫瘤標志物單克隆抗體溶于PH=7.4的PBS溶液中，濃度在0.5-1mg/ml，用量為一次5-10ul，滴入Au膜上面，然后放入冰箱4℃過夜；或在蒸汽浴37℃下修飾30分鐘，然后用PBS溶液清洗2-5次，此處PBS溶液的PH=7.4且含重量為1%的BSA；

●封閉，用100ul?BSA溶液封閉，冰箱4℃放置2小時，所述BSA溶液含重量為1%的BSA、體積為0.2%的tween20；

●用PH=7.4的PBS溶液清洗2-5次，室溫干燥。

6.根據權利要求1所述的血清腫瘤標志物檢測的微型化磁通門生物傳感器制作方法，其特征在于，步驟（5）中，所述抗原點樣，具體如下：

抗原用PH=7.4的PBS溶液稀釋，濃度為1-1000ng/ml，用量每次5-10ul，然后滴入Au膜上面，室溫下22℃培育1小時，或在蒸汽浴37℃下培育40分鐘，然后用含有重量為1%的BSA、體積為0.2%的tween20的PBS溶液清洗2次，室溫下干燥。

7.根據權利要求1所述的血清腫瘤標志物檢測的微型化磁通門生物傳感器制作方法，其特征在于，步驟（6）中，所述生物素化抗體固定，具體如下：

生物素化抗體濃度為0.5-1mg/ml的PBS溶液，每次取5-10ul，然后滴入Au膜上面，室溫22℃下培育1小時，然后用PBS溶液清洗5次，室溫下干燥。

8.根據權利要求1所述的血清腫瘤標志物檢測的微型化磁通門生物傳感器制作方法，其特征在于，步驟（7）中，所述磁性標簽固定，具體如下：

磁性標簽為鏈酶親和素修飾的磁性納米粒子或由磁性納米粒子構成的磁珠，取濃度為10ug/ml磁性納米粒子標簽20-40ul，滴入Au膜上面，室溫下培育20-40分鐘，然后用PBS溶液清洗，室溫干燥。