[發明專利]一種促神經修復材料及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201210397806.X
• 申請日: 2012-10-18
• 公開（公告）號: CN102861360A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 解慧琪;劉宏銀;羅靜聰;楊志明
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/36;A61L27/54;A61K35/30;A61K38/18;A61K47/46;A61P3/02
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

技術領域

本發明涉及一種促神經修復的材料，屬于生物材料領域。

背景技術

目前，理想的組織/器官修復是：形成構造的完整性，即外型的修復，并且能夠修復組織/器官的功能，形成功能上的整合修復，包括血管重建，神經重建等。

小腸黏膜下層（small?intestinal?submucosa，SIS）是一種天然的細胞外基質類生物材料，通常由豬小腸制備。SIS主要含有膠原、氨基多糖、糖蛋白等成分，并且含有多種生長因子，對組織的修復重建及細胞的生長有重要作用，如成纖維細胞生長因子、轉化生長因子和血管內皮生長因子等，可通過與細胞表面的多種受體作用后介導細胞信號轉導，從而對上皮細胞、血管內皮細胞、軟骨細胞、骨細胞等多種細胞具有促進生長、分化的作用。研究表明，SIS中的生長因子雖經消毒、凍干等處理，仍具有生物活性。同時，由于SIS具有無免疫原性、抗微生物活性，能促進組織再生等特性，已作為組織工程的支架材料廣泛應用于尿道、膀胱、血管、肌腱、神經、骨等多種組織缺損修復。

神經生長因子（nerve?growth?factor，NGF）是一種小分子蛋白，是神經營養因子中最早被發現，目前研究最為透徹的，具有神經元營養和促突起生長雙重生物學功能的一種神經細胞生長調節因子，NGF包含α、β、γ三個亞單位，活性區是β亞單位。它對中樞及周圍神經元的發育、分化、生長、再生和功能特性的表達均具有重要的調控作用。NGF在組織/器官修復中，特別是神經重建中發揮重要作用，是不可或缺的重要調控因子。研究發現，SIS中NGF含量僅為4.92±2.06pg/cm²。

目前在材料中添加的生長因子的方法主要是直接添加，或通過緩釋給藥技術來完成。直接添加生長因子的方式因生長因子會在短時間內釋放，釋放速度和活性均難以控制，有效性差，存在安全隱患。緩釋給藥技術可以控制生長因子在體內的釋放速度，但現有的緩釋材料大多為高分子合成材料，價格昂貴，藥物釋放的穩定性也不盡如人意，還可能因代謝問題給機體帶來副作用。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種新的促進神經修復的材料。

本發明促神經修復材料，它包括小腸黏膜下層和神經生長因子，所述神經生長因子的含量為1~500pg/cm²。

所述材料是由如下方法制備：

（1）取小腸黏膜下層和雪旺細胞，將雪旺細胞接種于小腸黏膜下層上，共培養，得復合了雪旺細胞的小腸黏膜下層；

（2）將復合了雪旺細胞的小腸黏膜下層反復凍融，凍干，即得所述的材料。

其中，所述步驟（1）中雪旺細胞的接種密度5×10³個/cm²~2.5×10⁵個/cm²。優選地，所述雪旺細胞為采用雙酶分步消化法處理大鼠雙側坐骨神經得到的原代細胞或者RSC96大鼠雪旺細胞，接種密度為2.5×10⁵個/cm²或者5×10³個/cm²。雙酶分步消化法采用公知方法，如，寧仁德等，“雪旺細胞分步消化培養及其純化實驗研究”，解剖與臨床2003年第8卷第4期公開的分步消化培養法。

其中，所述雙酶分步消化法使用的酶是胰蛋白酶和II型膠原酶。

其中，所述步驟（1）共培養的時間是3~15天。

其中，所述步驟（2）中反復凍融是將復合了雪旺細胞的小腸黏膜下層置于液氮中10分鐘，37℃處理10分鐘，重復操作3次。

其中，所述步驟（2）中反復凍融是將復合了雪旺細胞的小腸黏膜下層置于液氮中8~12分鐘，室溫放置15~25分鐘，置于搖床上用0.2~0.5%SDS溶液洗3~7分鐘，去離子水漂洗，重復操作3~5次；再用0.2~0.5%SDS溶液置于搖床上振蕩洗15~25分鐘，去離子水漂洗5~10分鐘。

本發明促神經修復的材料的制備方法，包括如下步驟：

（1）取小腸黏膜下層和雪旺細胞，將雪旺細胞接種于小腸黏膜下層上，共培養，得復合了雪旺細胞的小腸黏膜下層；

（2）將復合了雪旺細胞的小腸黏膜下層反復凍融，凍干，即得所述的材料。

其中，所述步驟（1）中雪旺細胞的接種密度5×10³個/cm²~2.5×10⁵個/cm²。