[發明專利]狂犬疫苗糖蛋白含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201210396467.3
• 申請日: 2012-10-18
• 公開（公告）號: CN103777021A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 高旭哲;戰辛;劉暢
• 申請（專利權）人: 遼寧成大生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 韓輝

1.一種種狂犬疫苗糖蛋白含量的檢測方法，其特征在于有以下步驟：

(1)將人抗狂犬病毒免疫球蛋白適宜稀釋度配制成包被液，每孔加包被液200μl，用封口膜封好，置于濕盒中37℃至少3小時，然后4℃過夜，取出倒空板，加300μl/孔封閉液，再用封口膜封好置于濕盒中37℃至少1小時，最后倒空板，用封口膜封好，置于-70℃保存；

(2)每個樣品以2倍法稀釋多個稀釋度(當糖蛋白含量較高時可增大稀釋度)，參考疫苗：以2倍法稀釋8個稀釋度，將預先包被好的酶標板從-70℃冰箱中取出，用洗板機清洗至少4次，洗液300μl/孔，倒空板，加樣200μl/孔，第1列加稀釋液作為空白，不加樣品；第2列加參考疫苗，由低稀釋度往高稀釋度加，第4～12列為樣品，加入不同樣品時應更換槍頭，將加完樣的酶標板用封口膜封好，置于37±℃濕盒中孵育至少90min；

(3)將板取出，用洗板機清洗至少5次，洗液300μl/孔，將適宜稀釋度的小鼠抗狂犬病毒單克隆抗體25ml，用多道加樣槍加到酶標板上，200μl/孔，然后封口膜封好，置于37℃濕盒中孵育至少90min；

(4)將板取出，用洗板機清洗至少5次，洗液300μl/孔，將適宜稀釋度的辣根酶標記山羊抗小鼠過氧化物25ml，用多道加樣槍加到酶標板上，200μl/孔，然后封口膜封好，置于37℃濕盒中孵育至少60min；

(5)將板取出，用洗板機清洗至少6次，洗液300μl/孔。加現配制好的顯色液，200μl/孔，室溫下避光反應至少30min，同時打開酶標儀預熱，加50μl/孔4.5mol/L?H₂SO₄終止反應，使用酶標儀，設定相應的空白，并在492nm測定；

(6)結果計算：將所有測定的OD值，逐一輸入計算模板中，按照參考疫苗糖蛋白含量和所對應的OD值做一次回歸方程Y＝aX+b，將同一樣品不同稀釋倍數下所對應的OD值代入方程，計算各稀釋度的糖蛋白含量，并乘以相對應的稀釋倍數，得到多個結果后，選擇結果相近數值的平均數作為檢驗的最終結果。