[發明專利]一種改良密度梯度離心法測定花粉密度的方法

有效

• 申請號: 201210394118.8
• 申請日: 2012-10-17
• 公開（公告）號: CN102890040A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 馬文廣;姚恒;牛永志;鄭昀曄;索文龍;宋碧清;李元君
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院;玉溪中煙種子有限責任公司
• 主分類號: G01N9/24
• 分類號: G01N9/24
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 姜開俠;姜開遠

技術領域

本發明屬于植物生理學領域，具體涉及一種改良密度梯度離心法測定花粉密度的方法。?

背景技術

花粉為粉狀物質，花粉的密度是花粉物理特性重要的指標之一。測定花粉的密度可以衡量花粉的內在品質，而花粉的品質直接影響植物種子的質量。所以測定花粉物理密度可應用于植物繁種的花粉質量的檢測工作。測定花粉的密度也可為篩選花粉提供一個科學可行的方法。?

常規的測定粉狀物質密度的方法是將粉狀物質裝入到一定量的含液體介質的李氏瓶內，并使得液體介質充分的浸沒粉狀顆粒。根據阿基米德定律，粉狀物體體積等于它所排開的液體體積，從而算出粉狀物單位體積的質量即為密度。利用這種方法測定花粉的密度，首先操作不方便；需要專門的儀器。其次，這種方法需要相對較多的花粉，而花粉收集不易，成本高昂。?

密度離心法的主要用途，主要用于物質的分離，在測定花粉密度方面未見相關報道。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種測量結果準確、重復性好、簡便易行的密度梯度離心法測定花粉密度的方法。?

本發明的目的是這樣實現的（除非另有說明外，本發明所采用的百分數均為質量百分數）：?

一種改良密度梯度離心法測定花粉密度的方法，包括蔗糖濃度梯度溶液配制、花粉樣品處理、花粉樣品鋪放、密度梯度離心液配制、離心沉降、繪制吸光度標準曲線、測定吸光度及花粉密度計算，具體包括：

A、蔗糖濃度梯度溶液配制：將蔗糖溶于水中，配制成質量百分比分別為20~70%的溶液；

B、花粉樣品處理：將蔗糖溶于水中，配置成質量百分比為10%的溶液，稱取0.001~0.01g待測花粉混合在100~1000μl?10%蔗糖溶液中；

C、花粉樣品鋪放：將含有花粉樣品的10%蔗糖溶液注入離心管底部；

D、密度梯度離心液配制：采用層鋪法將質量百分比20~70%的蔗糖溶液依次注入，已含有待測花粉樣品的10%蔗糖溶液的離心管底部，配置成密度梯度離心液；

E、離心沉降：在離心機中，20℃下，以4000~10000rpm速度，對含待測花粉樣品的密度梯度離心液離心5~15min，待花粉達到沉降平衡后靜置；

F、繪制吸光度標準曲線：選取花粉懸浮所在層相應濃度的蔗糖溶液，繪制待測花粉在該相應濃度的蔗糖溶液中的吸光度標準曲線；

G、測定吸光度值：取花粉沉降平衡后的密度梯度離心液，采用分光光度計在290?nm波長下，測定待測花粉懸浮層蔗糖溶液的吸光度值，利用標準曲線換算成該層濃度梯度下花粉的濃度值

H：花粉密度計算：花粉的密度按照下列公式計算：

其中：

ρ——花粉的密度

OD_n——第n層蔗糖梯度溶液中花粉濃度值

OD——所有含花粉的各蔗糖梯度溶液中花粉濃度值總和

ρ_n——第n梯度蔗糖溶液密度

本發明所述的密度梯度離心法用于測定花粉密度，具有以下優點：

1、對經典的密度梯度離心法進行改良，更適合于花粉密度的測定，且不需要繼續做細分梯度的重復測定，操作簡便、易行，重復性好；

2、采用科學的公式進行花粉密度的計算，結果準確；

3、測試需樣品量少。

附圖說明

圖1為本發明測定方法的流程框圖；?

圖2為質量百分比55%的蔗糖溶液中N.alata花粉的吸光度標準曲線；?

圖3為質量百分比55%的蔗糖溶液中N.rustica花粉的吸光度標準曲線；

圖4為質量百分比50%的蔗糖溶液中N.repanda花粉的吸光度標準曲線；

圖5為質量百分比55%的蔗糖溶液中K326花粉的吸光度標準曲線。

具體實施方式

下面結合附圖對本發明做進一步的說明，但不以任何方式對本發明加以限制，基于本發明教導所作的任何變換或改進，均落入本發明的保護范圍。?

一種改良密度梯度離心法測定花粉密度的方法，包括蔗糖濃度梯度溶液配制、花粉樣品處理、花粉樣品鋪放、密度梯度離心液配制、離心沉降、繪制吸光度標準曲線、測定吸光度及花粉密度計算，具體包括：?

A、蔗糖濃度梯度溶液配制：將蔗糖溶于水中，配制成質量百分比分別為20~70%的溶液；

B、花粉樣品處理：將蔗糖溶于水中，配置成質量百分比為10%的溶液，稱取0.001~0.01g待測花粉混合在100~1000μl?10%蔗糖溶液中；