[發明專利]一種多肽—納米金粒子藥物載體合成方法

無效

• 申請號: 201210391541.2
• 申請日: 2012-10-16
• 公開（公告）號: CN102961756A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 王建浩;邱琳;王車禮;蔣鵬舉;夏江
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K47/02;A61K45/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術領域

本發明涉及生物醫用材料和納米技術領域，具體為一種多肽—納米金粒子藥物載體合成方法。

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背景技術

目前，治療惡性腫瘤最有效的方法仍然是放療和化療。然而大多數藥物在有效殺死腫瘤細胞的同時也會破壞正常的組織細胞。為了提高藥物的靶向性和降低藥物的毒性，納米藥物傳輸載體引起了廣泛關注。?

納米藥物傳輸系統由于體積小，生物相容性好及毒性小等優點，在藥物傳遞領域有非常廣泛的應用。其中金納米粒子具有生物相容性好，粒徑小和表面容易修飾等優點，是一種很有潛力的納米藥物載體。目前國內外很多小組都在開展這方面的研究。已有一些研究將蛋白、抗體、聚合物等與納米金粒子連接實現跨膜傳輸（Rosi?N.?L.,?Giljohann?D.?A.,?Thaxton?C.?S.,?et?al.?Science,?2006,?312,?1027-1030）。有機小分子修飾的納米金粒子也被用作藥物傳遞（Kim?C.?K.,?Ghosh?P.,?Pagliuca?C.,?et?al.?J.?Am.?Chem.?Soc.,?2009,?131,?1360-1361）。然而，有機小分子生物相容性不好，這限制了其在生物中的應用。近年來，多肽分子也被用于修飾金納米粒子，并且可以使金納米粒子在水溶液中保持穩定（Levy?R.,?Thanh?N.?T.?K.,?Doty?R.?C.,?et?al.?J.?Am.?Chem.?Soc.,?2004,?126,?10076-10084）。?

因此，本專利提出一種兩親性多肽修飾納米金，具有良好的生物相容性，通過疏水疏水相互作用包裹藥物小分子；并在多肽序列中插入一段酶切位點，即通過酶切誘導實現藥物小分子的釋放。

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發明內容

本發明的目的是提供一種多肽—納米金粒子藥物載體合成方法。

多肽DDNNLAC與金納米粒子表面通過巰基結合，具有很強的親和性，N端帶負電荷的氨基酸可以使納米金粒子在水溶液中保持長期的穩定性；DDDD(PPG)₂LVPRGS(PPG)₃GC與金納米粒子結合后會在金納米粒子表面形成一種“疏水口袋”，通過疏水疏水相互作用包裹藥物小分子；功能多肽序列中間包含一個凝血酶（Thrombin）酶切位點Leu-Val-Pro-Arg-Gly-Ser（LVPRGS）。短序列的穩定多肽DDNNLAC與長序列的功能多肽以1：1比例混合，可在納米金粒子表面形成穩定的多肽層，并可以使凝血酶能夠接觸到酶切序列LVPRGS。本發明結合著兩種多肽的優勢，優化合成條件，建立了一種多肽—納米金粒子藥物載體合成方法。

實現本發明的具體技術方案如下：

提供了一種多肽—納米金粒子藥物載體合成方法，按照下述步驟進行：

（1）按照常規的檸檬酸鈉還原法制備出粒徑為20?nm的金納米粒子；

（2）使用穩定多肽和功能多肽的混合物，其中兩種多肽分子摩爾比是1:1；

（3）將該多肽混合物加入到粒徑為20?nm的金納米水溶液中，使多肽的摩爾總濃度為1-3?mM，其中多肽混合物與金納米粒子的摩爾比是100-300:1；震蕩10?min，離心12000?rpm后拋棄上清液，加入與上清液等量的PBS緩沖液（pH7.4），合成出多肽—納米金粒子復合物；

（4）將摩爾濃度為1-3?mM藥物分子的丙酮溶液與多肽—納米金粒子復合物混合（多肽—納米金粒子復合物與藥物分子的摩爾比是1:100-300），震蕩1?h，多次離心12000?rpm后拋棄上清液，加入與上清液等量的PBS緩沖液，最后合成出了多肽—納米金粒子藥物載體。

其中所述的穩定多肽的氨基酸組成為Asp-Asp-Asp-Asp-Asn-Leu-Ala-Cys，（DDNNLAC）；

其中所述的功能多肽氨基酸組成為：Asp-Asp-Asp-Asp-Pro-Pro-Gly-Pro-Pro-Gly-Leu-Val-Pro-Arg-Gly-Ser-Pro-Pro-Gly-Pro-Pro-Gly-Pro-Pro-Gly-Gly-Cys，{DDDD(PPG)₂LVPRGS(PPG)₃GC}，

其中所述的藥物分子是指要包裹的疏水性藥物，例如紫杉醇、阿霉素、替莫唑胺、柔紅霉素等疏水性藥物。