[發明專利]用于檢測冬生疫霉的引物對和探針及其檢測方法

有效

• 申請號: 201210385102.0
• 申請日: 2012-10-11
• 公開（公告）號: CN103725762A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 杜洪忠;吳品珊
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.用于檢測冬生疫霉的引物對，其特征在于，

上游引物PH-F：5’-CGACTTGCCACCGGGA-3’，

下游引物PH-R：5’-AACGGTACTTCTCTTTGCTCGAA-3’。

2.用于檢測冬生疫霉的探針，其特征在于，所述探針為：5’-F1-TTCCACAACCAATTCCAT-Q1-3'，其中F1為報告熒光基團，Q1為非熒光性的淬滅基團。

3.根據權利要求2所述的探針，其特征在于，F1為FAM，Q1為MGB。

4.檢測冬生疫霉的熒光RT-PCR法，其特征在于，以樣品DNA為模板，采用權利要求1所述的引物對以及權利要求2或3所述的探針進行熒光RT-PCR反應，每個循環結束采集數據，反應結束后根據擴增曲線判定結果。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，25μL的反應體系含有成分如下：樣品DNA?1μL(0.0005-50ng)，10×PCR反應緩沖液（不含Mg²⁺）2.5μL，25mM?MgCL₂2.0μL，2.5mM?dNTP?2.0μL，10μM引物PH-F?1μL，10μM引物PH-R?1μL，10μM探針1.5μL，5U/μL?Taq?DNA聚合酶0.3μL，ddH₂O?13.7μL。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，反應程序為：95℃3min；95℃10s，60℃30s，40個循環。

7.用于檢測冬生疫霉的試劑盒，其包括權利要求1所述的引物對以及權利要求2或3所述的探針。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液中的一種或多種。

9.根據權利要求7或8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性模板。

10.含有權利要求1所述引物對的用于檢測冬生疫霉的試劑盒。