[發(fā)明專利]一種鑒別奧利亞羅非魚、尼羅羅非魚及其雜交魚的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210384347.1
• 申請日: 2012-10-11
• 公開（公告）號: CN102864241A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李建林;俞菊華;唐永凱;李紅霞;徐跑
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于魚類分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種鑒別奧利亞羅非魚、尼羅羅非魚及其雜交魚的方法。

背景技術(shù)

????羅非魚(Tilapia)原產(chǎn)于非洲，該魚上世紀(jì)50年代引入我國，得到了較快發(fā)展，現(xiàn)在我國已是世界上最大的羅非魚生產(chǎn)國和出口國。我國主要養(yǎng)殖的羅非魚品種有尼羅羅非魚(Oreochromis?niloticus),奧利亞羅非魚(Oreochromis?aureus)和奧尼雜交羅非魚等。由于不同品種的羅非魚有很大的形態(tài)特征重疊，這使形態(tài)上鑒別不同羅非魚品種非常困難。另外，羅非魚品種間很容易雜交，且雜種可育，雜交種形態(tài)又與親本很相似，因此，很容易造成羅非魚種質(zhì)混雜，導(dǎo)致優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀退化，這也是目前制約我國羅非魚養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的突出問題。運(yùn)用分子標(biāo)記技術(shù)在DNA水平上尋找不同羅非魚品種的差異，可以快速、準(zhǔn)確鑒別不同羅非魚品種，為羅非魚的品種鑒定、種質(zhì)保護(hù)等提供依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種鑒別奧利亞羅非魚、尼羅羅非魚及其雜交魚的方法，有助于快速、準(zhǔn)確鑒別奧利亞羅非魚、尼羅羅非魚及其雜交魚，在羅非魚種質(zhì)鑒定、保種和選育中有極大的應(yīng)用價值。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種鑒別奧利亞羅非魚、尼羅羅非魚及其雜交魚的方法，包括以下步驟：

（1）采集待鑒別的羅非魚的血液、鰭條或其他組織樣品，采用DNA提取法提取基因組DNA；

（2）用步驟（1）獲得的基因組DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

（3）對步驟（2）的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測；

（4）根據(jù)PCR的電泳檢測結(jié)果，鑒別奧利亞羅非魚、尼羅羅非魚及奧利亞羅非魚和尼羅羅非魚雜交魚：尼羅羅非魚電泳檢測結(jié)果有1條178bp的條帶，奧利亞羅非魚有1條187bp的條帶，尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚的雜交魚有2條條帶，分別為178bp和187bp。

步驟（2）中，PCR擴(kuò)增采用的正義引物序列為：5′AATAAAACAGTTGATGGTGA??3′，反義引物為：5′?AAATGAAGAAACGCCCTCTT??3′。PCR體系總體積20?μL，其中含10×反應(yīng)緩沖液2?μL，Mg²⁺　2?mmol/L，dNTP　200μmol/L,上下游引物各0.2μmol/L，Taq酶0.5U，DNA模板?100?ng～200?ng，用滅菌雙蒸餾水補(bǔ)足體積。PCR反應(yīng)條件為：94℃?2min；94℃?50s，50℃退火?50s，72℃?50min，30個循環(huán)；72℃?延伸5?min，4℃保存。

步驟（3）中，電泳檢測的方法可采用8.0%的非變性聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳分離，銀染法染色后，拍照記錄電泳結(jié)果。

本發(fā)明的有益效果：運(yùn)用本發(fā)明所述的方法，可以在分子水平快速準(zhǔn)確地同時將奧利亞羅非魚、尼羅羅非魚及其雜交魚區(qū)別開來。

附圖說明

圖1為奧利亞羅非魚、尼羅羅非魚及其兩者的雜交魚PCR電泳檢測結(jié)果，

其中M：分子量標(biāo)準(zhǔn)

1-8：奧尼羅非魚

9-14：尼羅羅非魚(♀)×奧利亞羅非魚(♂)

15-20：尼羅羅非魚(♂)×奧利亞羅非魚(♀)

21-28：尼羅羅非魚；?

圖2為待檢奧利亞羅非魚PCR電泳檢測結(jié)果，

其中M：分子量標(biāo)準(zhǔn)

1-36：待檢奧尼羅非魚

37-39：尼羅羅非魚(♀)×奧利亞羅非魚(♂)；

圖3為待檢尼羅羅非魚PCR電泳檢測結(jié)果，

其中M：分子量標(biāo)準(zhǔn)

1-36：待檢尼羅羅非魚

37-39：尼羅羅非魚(♀)×奧利亞羅非魚(♂)。

具體實(shí)施方式

下列實(shí)施例中基因組DNA參照文獻(xiàn)提取（薩姆布魯克J，拉塞爾D?W著.?分子克隆試驗(yàn)指南?[M].?3版.黃培堂，王嘉璽，朱厚礎(chǔ)，等，譯.北京：科學(xué)出版社，2002：463-471）。

實(shí)施例1