[發明專利]1號染色體替換野生小家鼠品系C57BL/6.松江3?Chr1的構建

有效

• 申請號: 201210382385.3
• 申請日: 2012-10-10
• 公開（公告）號: CN103725759B
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 趙瑩;肖君華;邢正弘;陳國強;周宇荀;李凱;趙麗亞;晁天柱;柏熊;高捷
• 申請（專利權）人: 上海西普爾-必凱實驗動物有限公司;東華大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司31100
• 代理人: 陳靜

技術領域

本發明屬小鼠品系的構建領域，特別是涉及1號染色體替換野生小家鼠C57BL/6.松江3-Chr1的構建。

背景技術

實驗小家鼠品系遺傳多樣性缺乏會對復雜性狀研究造成較大的障礙，這主要表現在兩個方面：首先，群體中各個基因座位的等位基因數量較少，在針對多基因相關性狀的研究時，會由于基因背景的類同而導致部分性狀相關基因信息的遺漏；其次，基因組連鎖不平衡程度較大，這對性狀相關基因的初步定位有利，但對精細定位造成很大的困難，導致耗費大量的時間和個體。

野生小家鼠生存環境復雜多樣，且經歷了漫長的進化，小鼠遺傳多樣性的表現就是表型性狀豐富多樣：(1)野生小家鼠群體中存在更豐富的性狀差異，如野生小家鼠與實驗小鼠相比對病原體感染的易感性具有明顯差異。由于實驗小鼠生存的環境使之躲避了病原體的侵襲，野生小家鼠則經歷了選擇，因此可以在野生小家鼠群體中找對特定病原體具有抗性的個體或群體，有些野生小家鼠群體本身就是某些病原體的天然宿主，這對研究人類病原體感染的免疫遺傳學機制具有重大意義。(2)野生小家鼠豐富的遺傳多樣性也體現在基因相互作用上。例如將野生小家鼠與實驗小鼠雜交可出現各種基因相互作用，在進化上分化幾百萬年的基因產物表達于同一個體中，不可避免會發生強烈的基因相互作用。

中國野生小家鼠大致分為兩個亞種，即北方的musculus亞種及南方的castaneus亞種，松江位于上海，位于長江以南。通過DNA測序技術，對F1代小鼠1號染色體進行連鎖不平衡分析得知，松江3(來源于上海松江)屬于M.m.musculus和castaneus混合亞種，其野生小家鼠毛色為灰色，因為松江位于長江流域周邊，處于中國的中間地帶，南北方人員流動更為密切，因此松江3含有的M.m.musculus和castaneus亞種各占一半。

C57BL/6是第一個高質量的小鼠基因組序列草圖是通過C57BL/6繪制的。其基因信息明確、生育力強，廣泛應用于重大疾病的研究。鑒于C57BL/6小鼠基因信息明確，有必要以之作為背景，通過染色體替換試驗，來研究松江3小鼠各染色體及其上的基因的功能。

目前對于松江3小鼠的研究較少，其遺傳學特性較為不清楚。因此，克服技術難度以獲得引進了松江3小鼠染色體的C57BL/6小鼠品系是研究的關鍵。

發明內容

本發明的目的在于提供1號染色體替換野生小家鼠品系C57BL/6.松江3-Chr1的構建。

在本發明的第一方面，提供一種1號染色體替換實驗小鼠品系C57BL/6.松江3-Chr1的建立方法，所述方法包括：

(1)以松江3品系雄性小鼠作為父本、C57BL/6品系雌性小鼠作為母本進行雜交，獲得F1代小鼠；

(2)將F1代雌性小鼠與C57BL/6品系雄性小鼠雜交，獲得回交一代小鼠；該雄性回交小鼠中，Y染色體和線粒體DNA已被替換為C57BL/6品系來源的；使用多核苷酸多態性位點鑒定雄性回交小鼠的1號染色體，選擇1號染色體多核苷酸多態性位點鑒定結果為松江3品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串聯重復序列位點鑒定選擇到的雄性回交小鼠，選擇1號染色體短串聯重復序列位點鑒定結果為松江3品系小鼠所特有的回交小鼠；

(3)將選擇到的雄性回交小鼠與C57BL/6品系雌性小鼠雜交，獲得下一代回交小鼠，該雄性回交小鼠中，X染色體已被替換為C57BL/6品系來源的；

(4)使用多核苷酸多態性位點鑒定雄性回交小鼠的1號染色體，選擇1號染色體多核苷酸多態性位點鑒定結果為松江3品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串聯重復序列位點鑒定選擇到的雄性回交小鼠，選擇1號染色體短串聯重復序列位點鑒定結果為松江3品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；

(5)重復步驟(3)～(4)5-50次；從而獲得染色體替代動物品系，其以C57BL/6品系小鼠為背景，且其1號染色體被松江3品系小鼠的1號染色體替換。

另一優選例中，所述的1號染色體的多核苷酸多態性位點包括：

rs31426703，其在1號染色體上所處位置為chr1：12720994；在松江3品系小鼠染色體相應位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應位置的堿基為T；

rs32086848，其在1號染色體上所處位置為chr1：17643006；在松江3品系小鼠染色體相應位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應位置的堿基為A；