[發明專利]一種高特異高敏感檢測分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法

無效

• 申請號: 201210380671.6
• 申請日: 2012-10-10
• 公開（公告）號: CN103725757A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 金京勛;呂少波;李蘇楊
• 申請（專利權）人: 蘇州四同醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12Q1/14;C12Q1/10
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

1.一種高特異高敏感檢測分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法,其特征在于,包括以下步驟：

步驟1）制備反應液

反應液組成及含量為

8u/ul?Bst核酸聚合酶????????????????????????8u

10X耐熱聚合酶反應緩沖液???????????????1X，MgSO4?2mM

4M?甜菜堿???????????????????????????????????1M

10mM?d-NTP混合液??????????????????????????400μM

內引物

???BCE-FIP?????????????????????????????????40umol

???BCE-BIP?????????????????????????????????40umol

外引物

????BCE-F3?????????????????????????????????5umol

????BCE-B3?????????????????????????????????5umol

標本核酸???????????????????????????????????20ng

添加焦碳酸二乙酯處理水至總量達到25ul；

步驟2）提取臨床分離分泌腸毒素蠟樣芽胞桿菌，分泌嘔吐毒素蠟樣芽胞桿菌、環境分離蠟樣芽胞桿菌，以及若干臨床分離金黃色葡萄球菌、頭皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草綠色鏈球菌、大腸桿菌、克雷伯菌的核酸，多次進行反應，觀察它們的陰陽性。

2.根據權利要求1所述的高特異高敏感檢測分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述外引物BCE-F3的序列為TGCGAAAGATAGCTGGAA。

3.根據權利要求2所述的高特異高敏感檢測分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述外引物BCE-B3的序列為GAATTAGCCGACTGGATGA。

4.根據權利要求3所述的高特異高敏感檢測分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述內引物BCE-FIP的序列為GCCCTTATGCTTTTTTTGTGTCT-ACTATGCAGAAAAGATTTATGCTG。

5.根據權利要求4所述的高特異高敏感檢測分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述內引物BCE-BIP的序列為AGAGGGGAATACTAAGTACATGTCA-TAAGTGACCGAAACTGGC。

6.根據權利要求5所述的高特異高敏感檢測分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述反應液中加入熒光顯示物質溴化乙錠、鈣黃綠素進行實時檢查。