[發(fā)明專利]一種高特異高敏感檢測(cè)分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210380671.6
• 申請(qǐng)日: 2012-10-10
• 公開（公告）號(hào): CN103725757A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金京勛;呂少波;李蘇楊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州四同醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12Q1/14;C12Q1/10
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

1.一種高特異高敏感檢測(cè)分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法,其特征在于,包括以下步驟：

步驟1）制備反應(yīng)液

反應(yīng)液組成及含量為

8u/ul?Bst核酸聚合酶????????????????????????8u

10X耐熱聚合酶反應(yīng)緩沖液???????????????1X，MgSO4?2mM

4M?甜菜堿???????????????????????????????????1M

10mM?d-NTP混合液??????????????????????????400μM

內(nèi)引物

???BCE-FIP?????????????????????????????????40umol

???BCE-BIP?????????????????????????????????40umol

外引物

????BCE-F3?????????????????????????????????5umol

????BCE-B3?????????????????????????????????5umol

標(biāo)本核酸???????????????????????????????????20ng

添加焦碳酸二乙酯處理水至總量達(dá)到25ul；

步驟2）提取臨床分離分泌腸毒素蠟樣芽胞桿菌，分泌嘔吐毒素蠟樣芽胞桿菌、環(huán)境分離蠟樣芽胞桿菌，以及若干臨床分離金黃色葡萄球菌、頭皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草綠色鏈球菌、大腸桿菌、克雷伯菌的核酸，多次進(jìn)行反應(yīng)，觀察它們的陰陽性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高特異高敏感檢測(cè)分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述外引物BCE-F3的序列為TGCGAAAGATAGCTGGAA。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高特異高敏感檢測(cè)分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述外引物BCE-B3的序列為GAATTAGCCGACTGGATGA。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高特異高敏感檢測(cè)分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述內(nèi)引物BCE-FIP的序列為GCCCTTATGCTTTTTTTGTGTCT-ACTATGCAGAAAAGATTTATGCTG。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高特異高敏感檢測(cè)分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述內(nèi)引物BCE-BIP的序列為AGAGGGGAATACTAAGTACATGTCA-TAAGTGACCGAAACTGGC。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的高特異高敏感檢測(cè)分泌腸毒素蠟樣芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述反應(yīng)液中加入熒光顯示物質(zhì)溴化乙錠、鈣黃綠素進(jìn)行實(shí)時(shí)檢查。