[發(fā)明專利]一種高特異高敏感檢測(cè)大腸桿菌O157的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210380460.2
• 申請(qǐng)日: 2012-10-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103725753A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金京勛;呂少波;李蘇楊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州四同醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/10
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

1.一種高特異高敏感檢測(cè)大腸桿菌O157的方法,其特征在于，包括以下步驟：

步驟1）制備反應(yīng)液

反應(yīng)液組成及含量為

8u/ul?Bst核酸聚合酶??????????????????????????8u

10X耐熱聚合酶反應(yīng)緩沖液????????????????1X，MgSO4?2mM

4M?甜菜堿????????????????????????????????????1M

10mM?d-NTP混合液?????????????????????????????400μM

內(nèi)引物

???E-FIP???????????????????????????????????40umol

???E-BIP???????????????????????????????????40umol

外引物

???E-F3?????????????????????????????????????5umol

???E-B3?????????????????????????????????????5umol

標(biāo)本核酸?????????????????????????????????????20ng

添加焦碳酸二乙酯處理水至總量達(dá)到25ul；

步驟2）將上述反應(yīng)液放入63℃烘箱進(jìn)行反應(yīng)30-60min，渾濁為陽(yáng)性;

步驟3）使用臨床分離大腸桿菌O157菌株核酸，以及臨床分離金黃色葡萄球菌以及若干臨床分離頭皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草綠色鏈球菌、大腸桿菌、克雷伯菌的核酸，進(jìn)行反應(yīng)，觀察它們的陰陽(yáng)性。

2.???根據(jù)權(quán)利要求1所述的高特異高敏感檢測(cè)大腸桿菌O157的方法，其特征在于：所述外引物E-F3的序列為ACTGAAGAAATGCGATAGCT。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高特異高敏感檢測(cè)大腸桿菌O157的方法，其特征在于：所述外引物E-B3的序列為CTAACCGGTAACGGTGAA。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高特異高敏感檢測(cè)大腸桿菌O157的方法，其特征在于：所述內(nèi)引物E-FIP的序列為

ACCATCCGAGCCTAGGTAGG-AATTTTGTTGCAATAATGGACTC。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高特異高敏感檢測(cè)大腸桿菌O157的方法，其特征在于：所述內(nèi)引物E-BIP的序列為GCTGGGGTTTGGGTTTCAAG-ACTCCTGATTCTGCACTC。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的高特異高敏感檢測(cè)大腸桿菌O157的方法，其特征在于：所述反應(yīng)液中加入熒光顯示物質(zhì)溴化乙錠、鈣黃綠素進(jìn)行實(shí)時(shí)檢查。