[發(fā)明專利]一種HPLC法分析分離伊班膦酸鈉及雜質(zhì)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210380336.6
• 申請日: 2012-10-10
• 公開（公告）號: CN103134886A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王穎;胡同軍
• 申請（專利權(quán)）人: 成都苑東藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種HPLC方法，尤其是一種伊班膦酸鈉原料及制劑的分析方法。

背景技術(shù)

伊班膦酸鈉是防治以破壞細(xì)胞性骨吸收的為主的各類代謝性骨病及骨質(zhì)疏松癥的主要藥物，其結(jié)構(gòu)式為

伊班膦酸鈉

化學(xué)名稱為1-羥基-3-（N-甲基-戊胺基）-亞丙基二膦酸一鈉鹽一水合物。在合成該化合物的過程中，有幾步重要的中間體或降解產(chǎn)物可能會由于去除不完全而影響藥物的純度和質(zhì)量。而伊班膦酸鈉合成過程主要需控制的是中間體雜質(zhì)I（3-N-甲基-N正戊基胺丙酸）和成品的降解產(chǎn)物雜質(zhì)II（1-羥基-3-（N-戊胺基）-亞丙基二膦酸），它們的結(jié)構(gòu)式分別為：

雜質(zhì)I???????????????????雜質(zhì)II

目前國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中對伊班膦酸鈉產(chǎn)品主要控制的雜質(zhì)為亞磷酸和游離的磷酸鹽，未要求對上述兩種雜質(zhì)進(jìn)行檢測，現(xiàn)有技術(shù)中也僅有用薄層色譜法檢測雜質(zhì)II的相關(guān)文獻(xiàn)，而無使用HPLC檢測這兩種雜質(zhì)的相關(guān)報道，但采用薄層色譜法存在靈敏度不高和不能對雜質(zhì)II進(jìn)行定量測定的缺陷。眾所周知，雜質(zhì)水平是藥品安全性和有效性的重要因素之一，因此，本領(lǐng)域需要一種能有效實現(xiàn)伊班膦酸鈉與雜質(zhì)I和雜質(zhì)II分離的方法。

現(xiàn)有技術(shù)中伊班膦酸鈉含量的測定方法主要有兩種：一是采用衍生后的紫外分光光度法，二是用硝酸釷溶液滴定。但這兩種測定方法均存在操作過于繁瑣，受干擾因素較多，準(zhǔn)確度低的缺點；同時，兩種方法均需要大量的樣品，大大增加了檢測成本。

目前，用于HPLC檢測分析的色譜柱按填充劑的類型不同，可分為：C8柱、C18柱、苯基柱、氨基柱、氰基柱、凝膠柱、蛋白柱、纖維柱、離子交換柱等等，用于液相洗脫的流動相也可以是水、甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液或是上述溶液按不同比例組成的混合物，用于HPLC檢測相關(guān)的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、熒光檢測器、電導(dǎo)檢測器等，而紫外檢測器常用的檢測波長在190~400nm之間。本發(fā)明經(jīng)反復(fù)試驗發(fā)現(xiàn)，采用以辛烷基或十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以甲醇-磷酸鹽緩沖液或乙腈-磷酸鹽緩沖液為流動相進(jìn)行色譜柱分離后，用紫外檢測器進(jìn)行檢測，不僅可以有效實現(xiàn)分離雜質(zhì)I、雜質(zhì)II，專屬性強(qiáng)，同時又可精確測定伊班膦酸鈉的含量，準(zhǔn)確度高，因此本發(fā)明符合這種需求。

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述技術(shù)缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種高效液相色譜法分析分離伊班膦酸鈉及其雜質(zhì)I和雜質(zhì)II的方法，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)伊班膦酸鈉及其雜質(zhì)的有效分離，而且還能準(zhǔn)確測定伊班膦酸鈉的含量。該方法采用以辛烷基或十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以甲醇-磷酸鹽緩沖液或乙腈-磷酸鹽緩沖液為流動相進(jìn)行色譜柱分離后，用紫外檢測器對伊班膦酸鈉及其雜質(zhì)進(jìn)行檢測。

其中，色譜柱規(guī)格為150×4.6mm或200×4.6mm或250×4.6mm。

磷酸鹽緩沖液濃度為0.01mol/L~0.05mol/L，優(yōu)選0.02mol/L；磷酸鹽緩沖液具體指磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉溶液和磷酸二氫銨溶液中的一種或幾種的組合，優(yōu)選磷酸二氫鉀溶液。

流動相中甲醇或乙腈與磷酸鹽緩沖液的體積比為6：94~2：98；甲醇或乙腈與磷酸鹽緩沖液體積比優(yōu)選3：97。

紫外檢測波長為195nm~205nm，優(yōu)選195nm或200nm。

流動相流速為0.8~1.2mL/min，優(yōu)選1.0mL/min。

進(jìn)一步，本發(fā)明所述的分析分離方法，該方法用于伊班膦酸鈉雜質(zhì)的分析分離包括以下4個步驟：

（1）取伊班膦酸鈉原料適量，加甲醇-磷酸鹽緩沖液或乙腈-磷酸鹽緩沖液或水制成每1mL含伊班膦酸鈉1mg~4mg的供試品溶液；

（2）精密稱取伊班膦酸鈉、雜質(zhì)I、雜質(zhì)II對照品適量，加甲醇-磷酸鹽緩沖液或乙腈-磷酸鹽緩沖液或水制成每1mL各含1μg~4μg的溶液作為對照品溶液；

（3）設(shè)置流動相流速為0.8~1.2mL/min；檢測波長為195nm~205nm；

（4）分別取步驟（1）中供試品溶液、步驟（2）中對照品溶液20-50μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算得伊班膦酸鈉雜質(zhì)I和雜質(zhì)II的含量。

更進(jìn)一步，本發(fā)明所述的分析分離方法，該方法用于伊班膦酸鈉原料中雜質(zhì)的分析分離包括以下4個步驟：

（1）取伊班膦酸鈉原料待測樣品適量，加乙腈-磷酸二氫鉀溶液制成每1mL中含伊班膦酸鈉4mg的溶液作為供試品溶液；