[發(fā)明專利]一種檢測(cè)WT1基因mRNA表達(dá)量的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210380269.8
• 申請(qǐng)日: 2012-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN102912018A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 童永清;李艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 童永清;李艷
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 北京三高永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11138
• 代理人: 徐立

1.一種檢測(cè)WT1基因mRNA表達(dá)量的試劑盒，包括檢測(cè)用引物、熒光探針、cDNA第一鏈合成試劑、熒光定量PCR混合液、陰性對(duì)照和陽性對(duì)照，其特征在于，所述檢測(cè)用引物、熒光探針包括WT1基因引物、內(nèi)參基因ABL引物及Taqman熒光探針，其中：

WT1基因上游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:1所示；

WT1基因下游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:2所示；

WT1基因Taqman熒光探針如序列表中SEQ?ID?NO:3所示；

ABL基因上游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:4所示；

ABL基因下游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:5所示；

ABL基因Taqman熒光探針如序列表中SEQ?ID?NO:6所示；

所述cDNA第一鏈合成試劑含有MgCl₂、逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液、dNTPs、RNA酶抑制劑、Oligo(dT)₁₅、AMV逆轉(zhuǎn)錄酶和無RNase去離子水；所述熒光定量PCR混合液含有PCR預(yù)混合液、Mg²⁺、dNTPs、dUTP、Taq酶、UNG酶和無RNase去離子水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括內(nèi)部陽性控制序列、內(nèi)部陽性控制序列的引物和Taqman熒光探針，其中：內(nèi)部陽性控制序列如序列表中SEQ?IDNO:7所示；內(nèi)部陽性控制序列的上游引物如序列表中SEQ?ID?NO:8所示；內(nèi)部陽性控制序列的下游引物如序列表中SEQ?ID?NO:9所示；內(nèi)部陽性控制序列的Taqman熒光探針如序列表中SEQ?ID?NO:10所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述WT1基因的Taqman熒光探針和ABL基因的Taqman熒光探針的5’端連接有熒光報(bào)告基團(tuán)FAM，3’端均連接有熒光淬滅基團(tuán)TAMRA；所述內(nèi)部陽性控制序列的Taqman熒光探針的5’端連接有熒光報(bào)告基團(tuán)TET，3’端連接有熒光淬滅基團(tuán)TAMRA。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述內(nèi)參基因ABL的核酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:11所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對(duì)照為去離子水；所述陽性對(duì)照為含有WT1基因的總RNA樣品。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述cDNA第一鏈合成試劑為：25mmol/LMgCl₂?4μL，10×逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液2μL，10mmol/L?dNTP?2μL，RNA酶抑制劑0.5μL，Oligo(dT)₁₅?0.5μg，AMV逆轉(zhuǎn)錄酶1.5U和無RNase去離子水，總體積11μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光定量PCR的混合液為：1×的PCR預(yù)混合液、2.5-4.0mM的Mg²⁺、0.2-0.4mM的dNTPs、0.3-0.6mM的dUTP、0.2U/μL的Taq酶、0.01-0.05U/μL的UNG酶和無RNase去離子水。