[發明專利]檢測卵巢腫瘤的血清學生物標記物miR-22及其用途

無效

• 申請號: 201210379896.X
• 申請日: 2012-10-09
• 公開（公告）號: CN102864237A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 丁先鋒;紀婷;唐文杲;蔣理想;李彩霞
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/113
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發明屬于生物技術和醫學領域，具體而言涉及一種卵巢癌腫瘤的生物標記物——血清microRNA-22(miR-22)，及其篩選方法和在輔助個體卵巢腫瘤篩查與臨床診斷及病情發展中的應用。

背景技術

卵巢癌(ovarian?carcinoma)是女性生殖器官常見的腫瘤之一，大多數是由于卵巢上皮細胞和包涵囊腫組織上皮細胞在多種致癌因子作用下，發生了基因突變，致使細胞增生失控。卵巢癌是死亡率極高的婦科惡性腫瘤，其組織學形態多種多樣，是一類高度異質性的腫瘤，具有發病率高、但病程進展緩慢、早期癥狀不易察覺；且侵襲轉移能力較強、自然生存期長等特點。在臨床檢查中，多采用CA-125水平檢測、超聲檢查、以及聯合CA-125動態監測和盆腔超聲檢查及彩色多普勒血流顯像等檢測方法盡可能的提高卵巢檢出率。但目前80%的卵巢癌病人發現時已是中晚期(Ⅱ-Ⅳ)，采取腫瘤細胞減滅術以及化療患者的5年存活率僅為20%左右,且治療比較復雜，預后效果比較差。雖然早期診斷及輔助化療和激素治療使得卵巢癌的死亡率有所降低，但在導致女性死亡的惡性腫瘤中卵巢癌仍居世界前列。

MicroRNA(miRNA)是一類生物體內自然形成的小分子非編碼RNA，在組織和時間上具有特異性，參與調節其特異靶基因的表達，從而控制蛋白的產生，具有調節發育時序，細胞增殖，分化，代謝，凋亡與應激以及參與脊椎動物心臟、肌肉以及神經系統的形成，同時調控腫瘤發生的功能。約50%的已知人類miRA基因定位于和腫瘤相關的染色體區域，而不斷累積的研究成果也已充分證實在腫瘤發生與發展過程中呈現出不同的表達水平，具有篩查和診斷卵巢腫瘤并對治療方案的選擇和預后分析具有潛在的指示作用。

高通量測序是基于傳統的Sanger測序的基礎上發展而來的分子生物學的分析方法之一是，雖然此技術建立時間不長，但其發展速度相當快。該技術能夠對數百萬個分子進行同時測序。這使得對一個物種的轉錄組和基因組進行細致全貌的分析成為可能。高通量測序的具有傳統測序法達不到的優點，首先，它是利用芯片技術進行測序，可以在數百萬個點上同時閱讀測序，把利用平行處理的方略讀取結果，通量較高；其次，高通量測序具有精確地樣本定量功能，其原理為樣本的DNA或者RNA被測序的次數反應了在樣品中的豐度；同時高通量測序的成本相對較為低廉。對于miRNA序列較短、同源性高，利用芯片檢測非常困難。而利用高通量技術不僅能夠解決此問題，而且能夠發現新的miRNA。利用此技術對卵巢腫瘤患者血清與健康血清樣本分別進行測序，并對比其序列組成以及表達譜特征，對于發現生物標記物用于卵巢疾病的早期診斷有重要的意義。

生物標記物是指能將機體的生理和病理狀態區分開來的生物分子。篩選到可用于腫瘤早期發現、早期診斷的生物標記物可大大提高腫瘤患者的臨床治療效果。最新數據顯示腫瘤組織普遍具有特征性的miRNA表達譜，即指腫瘤細胞某幾種miRNA的表達水平常與同一組織中的正常細胞存在顯著差異，而特征性的miRNA異常表達可望成為用于腫瘤的診斷、病理分級、臨床分期、療效與預后的生物標記物，顯示了良好的臨床應用前景。

近年來研究人員發現在血漿和血清中也存在獨立于細胞之外并且即使在嚴酷環境下也能明顯保持穩定的miRNA分子，而作為生物檢測樣本，血清具有取材方便、無創傷性、并可連續的體外檢測的優點，使得基于miRNA定性和定量檢測技術尋找癌癥特異性的血清miRNA作為分子標記的方法比傳統的蛋白分子標記方法將更加有效，進而可以克服分子標記在抗體制備和定量分析上發展所遇到的瓶頸。因此，開發一種可輔助卵巢癌篩查和診斷的血清miRNA作為生物標記物，具有廣泛的科研價值和臨床應用前景。

目前已有實驗證實，microRNA在血液中被有效地保護，使其免受在血液中大量存在的RNase的降解，表現出高度的穩定性。對于血液microRNA能否作為一種無創性檢測手段，目前的研究主要集中在癌癥的早期診斷方面。然而，目前還沒有將血清/血漿microRNA應用于卵巢疾病的輔助判斷、危險度評價等方面的報道，若能篩選與卵巢組織病理狀態有關的特異或異常表達的血清/血漿microRNA作為疾病檢測的生物標志物，并研制相應的檢測試劑盒，將會大大提升卵巢腫瘤疾病的檢測水平。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種具有較高靶向性、穩定性及高效率檢測卵巢腫瘤的血清學生物標記物及其用途。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種檢測卵巢腫瘤的血清學的生物標記物microRNA-22(miR-22)，其miRNA序列為：