[發明專利]用于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）疫苗的重組蛋白HF2及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210379588.7
• 申請日: 2012-09-29
• 公開（公告）號: CN102977214A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 馮強;鄒全明;曾浩;樊紹文;盧陸;董衍東;魯東水;吳翼;蔡昌芝
• 申請（專利權）人: 重慶原倫生物科技有限公司;中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;A61K39/085;A61P31/04;G01N33/569;C12R1/19
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

1.一種重組蛋白HF2，其特征在于：該蛋白由金黃色葡萄球菌alpha溶血素（Hla）與纖維連接蛋白結合蛋白(FNBA)片段組成，其中，Hla與FNBA通過連接肽融合。

2.根據權利要求1所述的重組蛋白HF2，其特征在于，該重組蛋白具有SEQ?ID?NO:1所示的核酸序列及SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列。

3.根據權利要求1所述的重組蛋白HF2，其特征在于，所述連接肽為Linker，該連接肽為-(Linker)n-，其中Linker為GGGGS或GGSGG或YAPVDV，n為1-4，優選Linker為GGGGS，n為1。

4.根據權利要求1所述的重組蛋白HF2，其特征在于：所述Hla為第110-150缺失的突變體Hla(delta?110-150)或Hla(H35L,delta110-150)，優選為Hla(H35L,delta110-150)。

5.根據權利要求4述的重組蛋白HF2，其特征在于：所述Hla為第110-150缺失的突變體Hla(H35L,delta110-150)的金黃色葡萄球菌alpha溶血素全毒素Hla，其DNA序列如SEQ?ID?NO:3所示，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:4所示。

6.根據權利要求1所述的重組蛋白HF2，其特征在于：所述FNBA為金黃色葡萄球菌纖維連接蛋白結合蛋白膜外區，其DNA序列如SEQ?ID?NO:5所示，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:6所示。

7.權利要求1-6任一所述的重組蛋白HF2的制備方法蛋白，其特征在于，包括以下步驟：

1）全基因合成以獲得編碼Hla(H35L?delta110-150)的DNA序列；

2）用核酸序列如SEQ?ID?NO:7及SEQ?ID?NO:8所示的正向和反向引物，擴增出Hla；

3）用核酸序列如DNA序列為SEQ?ID?NO:9及SEQ?ID?NO:10所示的正向和反向引物，從MRSA基因組擴增出FNBA；

4）以Hla及FNBA做模板，用核酸序列如SEQ?ID?NO:7及SEQ?ID?NO:10所示的正向和反向引物擴增出重組融合蛋白HF2片段；

5）將所獲得的HF2基因片段克隆至表達載體，然后轉化至宿主菌，誘導轉化后的宿主菌表達HF2重組蛋白；

6）純化重組蛋白。

8.一種表達載體，其特征在于：包含編碼權利要求1所述重組蛋白HF2的核酸序列。

9.根據權利要求8所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體為pGex系列載體、pET系列載體，優選為pGex-6P-2。

10.一種表達如權利要求8或9所述表達載體的宿主菌。

11.如權利要求10所述的宿主菌，其特征在于，所述宿主菌為大腸桿菌XL1-blue、BL21系列或HMS174系列，優選為大腸桿菌XL1-blue。

12.權利要求1所述的重組蛋白HF2在制備抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的亞單位疫苗中的應用。

13.權利要求1所述的重組蛋白HF2在制備耐甲氧西林金黃色葡萄球菌檢測試劑盒中的應用。