[發(fā)明專利]一種基于化學(xué)衍生的尿液中甾體激素的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210374874.4
• 申請日: 2012-09-27
• 公開（公告）號: CN103698414A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許國旺;戴偉東;尹沛源;路鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種基于化學(xué)衍生的尿液中甾體激素的檢測方法，其特征在于：采用4-二甲胺基苯甲酸作為衍生化試劑進行酯化，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測衍生化后的甾體激素，包括以下步驟：

第一步，收集尿液，離心除雜質(zhì)后保存；

第二步，取第一步得到的尿液，采用SPE柱提取其中的甾體激素；

第三步，過SPE柱的洗脫液進行冷凍干燥；

第四步，在冷凍干燥的離心管內(nèi)，加入4-二甲氨基苯甲酸（DMAB）、4-二甲氨基吡啶（DMAP）和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺（EDC）的二氯甲烷溶液，渦旋混勻，轉(zhuǎn)移至玻璃進樣小瓶中，蓋上瓶蓋密封，水浴加熱進行衍生化，然后蒸干二氯甲烷溶液；

第五步，加溶解液渦旋溶解殘渣，等待液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用進樣分析；

第六步，進行液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測分析甾體激素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，第一步中，所述的離心后尿樣的保存溫度為-20℃。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種基于化學(xué)衍生的尿液中甾體激素的檢測方法，其特征在于，第二步中，以所用尿液體積為500μL為基準(zhǔn)，SPE柱為Waters?Oasis?HLB柱，填料量為30mg，洗脫步驟為：

1）SPE柱先用1.5-3mL甲醇平衡；

2）然后用1.5-3mL去離子水水洗；

3）上樣：在500μL尿液中加入50μL水和450μL甲醇，并將這1mL的溶液上樣至SPE柱上；

4）淋洗：正壓條件下用1mL45％甲醇溶液淋洗，重復(fù)淋洗共3次；

5）洗脫：正壓條件下用1.5mL90％甲醇溶液進行洗脫。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基于化學(xué)衍生的尿液中甾體激素的檢測方法，其特征在于，第四步中，所用的DMAB和DMAP的二氯甲烷溶液濃度為2mg/mL，EDC的二氯甲烷溶液濃度為5mg/mL，加入體積均為80μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，第四步中，水浴加熱進行衍生化溫度為65-75℃，水浴時間為4-6小時，水浴蒸干二氯甲烷的溫度為40-50℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，第五步中，溶解殘渣所用溶液為200μL50％乙腈/水溶液，渦旋時間為1分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，第五步中，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用進樣分析的體積為20μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，第三步中，冷凍干燥時間為3-5小時。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，第一步，尿液置于低溫高速離心機中離心10min去除雜質(zhì)后保存，低溫高速離心機轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分鐘，溫度4℃。