[發明專利]一種半乳糖凝集素-3結合蛋白及其制備和應用

有效

• 申請號: 201210371948.9
• 申請日: 2012-09-28
• 公開（公告）號: CN102942624A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 孫黎;陳騁
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C12N15/70;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體的說是一種半乳糖凝集素-3結合蛋白及其制備和應用。?

背景技術

半乳糖凝集素-3結合蛋白(galectin-3?binding?protein,G3BP)是一種分泌至胞外的糖蛋白，它能夠結合半乳糖凝集素-3（galectin-3）以及其它胞外蛋白，如膠原蛋白（collagen）、纖維連接蛋白（fibronectin）、β1整合蛋白（β1?integrins）等。目前研究最多的是人類G3BP，發現它在分子結構上含有一個清道夫受體（Scavenger?receptor）功能域，該功能域與靶分子結合有關。人類G3BP在免疫組織和細胞中表達，并且在病毒感染以及某些癌癥病人血清中表達上調，因此可能參與機體的免疫抵抗、炎癥反應、腫瘤發生等過程。迄今G3BP只在兩種魚類（斑馬魚和大西洋鮭）中發現，但其功能則完全未知。?

發明內容

本發明目的在于提供一種半乳糖凝集素-3結合蛋白及其制備和應用。?

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：?

一種半乳糖凝集素-3結合蛋白，半乳糖凝集素-3結合蛋白為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示。?

半乳糖凝集素-3結合蛋白的制備，?

1）質粒pETG3BP的構建：?

以半滑舌鰨cDNA為模板，用引物F1和R1進行PCR擴增，PCR產物純化后與T-Simple連接，連接混合液轉化大腸桿菌后在含安卡青霉素、Xgal、異丙基-β-D-硫代半乳糖苷的LB培養基上培養2－8h,篩選轉化子提取質粒，得重組質粒pTSG3BP；?

將pTSG3BP用Sma?I酶切，回收1.6kb片段，連接于pET259，連接液轉化入大腸桿菌，在含卡那霉素的LB培養基上培養18－24小時,篩選轉化子提取質粒，即為pETG3BP；?

2）半乳糖凝集素-3結合蛋白的制備?

將上述步驟1）的質粒pETG3BP轉化BL21(DE3)，在含有卡那霉素的LB培養基上培養,篩選轉化子即為BL21/pETG3BP；將BL21/pETG3BP用終濃度為1mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導表達后，采用親和層析柱純化重組蛋白，即為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示的半乳糖凝集素-3結合蛋白。?

所述步驟1）中F1為5’-CCCGGGGCCACCATGGCTTTTACATTTGACCTGTTC?-3’；R1為5’-CCCGGGGACTCGGACGTACACTGGTCT-3’。?

半乳糖凝集素-3結合蛋白的應用，所述半乳糖凝集素-3結合蛋白能夠結合細菌，繼而作為細菌的抑制劑。?

所述半乳糖凝集素-3結合蛋白能夠結合革蘭氏陰性細菌或革蘭氏陽性細菌。?

所述革蘭氏陰性細菌為熒光假單胞菌（Pseudomonas?fluorescens）、遲緩愛德華氏菌（Edwardsiella?tarda）、大腸桿菌（Escherichia?coli）或鰻弧菌（Vibrio?anguillarum）；革蘭氏陽性細菌為海豚鏈球菌（Streptococcus?iniae）或枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）。?

本發明具有如下優點：本發明的半乳糖凝集素-3結合蛋白能夠與多種革蘭氏陰性細菌和革蘭氏陽性細菌顯著性結合。本發明所得自半滑舌鰨中克隆獲得了G3BP，其與多種細菌具有顯著性結合能力，本發明乳糖凝集素-3結合蛋白能夠與多種革蘭氏陰性細菌和革蘭氏陽性細菌顯著性結合；因此該蛋白具有在抗細菌感染中應用的潛能。?

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的純化得到的半乳糖凝集素-3結合蛋白電泳圖譜（其中，純化得到的半乳糖凝集素-3結合蛋白為泳道2；泳道1：分子量marker）。?

圖2為本發明實施例提供的半乳糖凝集素-3結合蛋白與各種細菌的結合能力檢測結果。?

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步說明。實施例旨在對本發明進行舉例描述，而非以任何形式對本發明進行限制。?

在本發明實施例中所涉及到的常規性實驗方法均采用如下方法：?

1.質粒提取、DNA(PCR)產物純化、DNA片段從凝膠中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相應試劑盒。?