[發(fā)明專利]一種半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210371948.9
• 申請(qǐng)日: 2012-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102942624A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫黎;陳騁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號(hào): C07K14/46
• 分類號(hào): C07K14/46;C12N15/70;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白，其特征在于：半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示。

2.一種權(quán)利要求1所述半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白的制備，其特征在于：

1）質(zhì)粒pETG3BP的構(gòu)建：

以半滑舌鰨cDNA為模板，用引物F1和R1進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物純化后與T-Simple連接，連接混合液轉(zhuǎn)化大腸桿菌后在含安卡青霉素、Xgal、異丙基-β-D-硫代半乳糖苷的LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)2－8h,篩選轉(zhuǎn)化子提取質(zhì)粒，得重組質(zhì)粒pTSG3BP；

將pTSG3BP用Sma?I酶切，回收1.6kb片段，連接于pET259，連接液轉(zhuǎn)化入大腸桿菌，在含卡那霉素的LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)18－24小時(shí),篩選轉(zhuǎn)化子提取質(zhì)粒，即為pETG3BP；

2）半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白的制備

將上述步驟1）的質(zhì)粒pETG3BP轉(zhuǎn)化BL21(DE3)，在含有卡那霉素的LB培養(yǎng)基上培養(yǎng),篩選轉(zhuǎn)化子即為BL21/pETG3BP；將BL21/pETG3BP用終濃度為1mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導(dǎo)表達(dá)后，采用親和層析柱純化重組蛋白，即為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示的半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白。

3.按權(quán)利要求2所述的半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白的制備，其特征在于：所述步驟1）中F1為5’-CCCGGGGCCACCATGGCTTTTACATTTGACCTGTTC-3’；R1為5’-CCCGGGGACTCGGACGTACACTGGTCT-3’。

4.一種權(quán)利要求1所述的半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白的應(yīng)用，其特征在于：所述半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白能夠結(jié)合細(xì)菌，繼而作為細(xì)菌的抑制劑。

5.按權(quán)利要求4所述的半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白的應(yīng)用，其特征在于：所述半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白能夠結(jié)合革蘭氏陰性細(xì)菌或革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。

6.按權(quán)利要求5所述的半乳糖凝集素-3結(jié)合蛋白的應(yīng)用，其特征在于：所述革蘭氏陰性細(xì)菌為熒光假單胞菌（Pseudomonas?fluorescens）、遲緩愛(ài)德華氏菌（Edwardsiella?tarda）、大腸桿菌（Escherichia?coli）或鰻弧菌（Vibrio?anguillarum）；革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌為海豚鏈球菌（Streptococcus?iniae）或枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）。