[發(fā)明專利]制備胰腺干細(xì)胞的方法及其專用培養(yǎng)基組合

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210371241.8
• 申請(qǐng)日: 2012-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103710302B
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙春華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12N5/074
• 分類號(hào): C12N5/074
• 代理公司: 北京戈程知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種培養(yǎng)基C，其由動(dòng)物細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和溶質(zhì)組成；所述溶質(zhì)及其在動(dòng)物細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的濃度如下：0.50×10^-5mol/L-2.0×10^-5mol/L維甲酸、10ng/ml-30ng/ml?EGF、10ng/ml-100ng/ml?bFGF、20ng/ml-200ng/ml?Dkk1、0.2mmol/L-10mmol/L谷氨酰胺、體積比為0.2%-5%的非必需氨基酸以及可選的體積比為0.5%-5%的B27；優(yōu)選地，0.95×10^-5mol/L-1.05×10^-5mol/L維甲酸、19ng/ml-21ng/ml?EGF、32ng/ml-64ng/ml?bFGF、80ng/ml-120ng/ml?Dkk1、1.9mmol/L-2.1mmol/L谷氨酰胺、體積比為0.95%-1.05%的非必需氨基酸以及可選的體積比為1.9%-2.1%的B27；并且其中所述動(dòng)物細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基為高糖DMEM培養(yǎng)基或DMEM/F12培養(yǎng)基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基C，其特征在于其由DMEM/F12培養(yǎng)基和溶質(zhì)組成；所述溶質(zhì)及其在培養(yǎng)基B中的濃度如下：10^-5mol/L維甲酸、20ng/ml?EGF、60ng/ml?bFGF、100ng/ml?Dkk1、2mmol/L谷氨酰胺、體積比為1%的非必需氨基酸以及可選的體積比為2%的B27。

3.一種將間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為胰腺干細(xì)胞的試劑盒，其由培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C組成，其中

所述培養(yǎng)基A由動(dòng)物細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和溶質(zhì)組成；所述溶質(zhì)及其在動(dòng)物細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的濃度如下：1.00ml/L-20.00ml/L胎牛血清、1.00ng/mL-15.00ng/mL?activin?A和10-200ng/mL?wnt3a；優(yōu)選地，4.75ml/L-5.25ml/L胎牛血清、4.75ng/mL-5.25ng/mL?activin?A和40-60ng/mL?wnt3a；

所述培養(yǎng)基B由動(dòng)物細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和溶質(zhì)組成；所述溶質(zhì)及其在動(dòng)物細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的濃度如下：1.00ml/L-20.00ml/L胎牛血清和1.00ng/mL-15.00ng/mL?activin?A；優(yōu)選地，4.75ml/L-5.25ml/L胎牛血清和4.75ng/mL-5.25ng/mL?activin?A；

所述培養(yǎng)基C如權(quán)利要求1所述；

并且其中所述動(dòng)物細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基為高糖DMEM培養(yǎng)基或DMEM/F12培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的將間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為胰腺干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于：

所述培養(yǎng)基A由高糖DMEM培養(yǎng)基和溶質(zhì)組成；所述溶質(zhì)及其在培養(yǎng)基A中的濃度如下：5ml/L胎牛血清、5ng/mL?activin?A和5ng/mL?wnt3a；

所述培養(yǎng)基B由高糖DMEM培養(yǎng)基和溶質(zhì)組成；所述溶質(zhì)及其在培養(yǎng)基A中的濃度如下：5ml/L胎牛血清和5ng/mL?activin?A；

所述培養(yǎng)基C如權(quán)利要求2所述。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的將間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為胰腺干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于其還包括培養(yǎng)基D或E，其中

培養(yǎng)基D由高糖DMEM培養(yǎng)基和溶質(zhì)組成；所述溶質(zhì)及其在培養(yǎng)基D中的濃度如下：5ml/L胎牛血清、20ng/ml?exendin-4、10ng/ml?activin?A、10mmol/L尼克酰胺、體積比為2%的B27和體積比為1%的N2；

培養(yǎng)基E由高糖DMEM培養(yǎng)基和溶質(zhì)組成；所述溶質(zhì)及其在培養(yǎng)基E中的濃度如下：5ml/L胎牛血清、20ng/ml?exendin-4、15ng/ml?FGF7、10mmol/L尼克酰胺、體積比為2%的B27和體積比為1%的N2。

6.根據(jù)權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的將間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為胰腺干細(xì)胞的試劑盒，其特征在于所述間充質(zhì)干細(xì)胞為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，優(yōu)選地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為第3代間充質(zhì)干細(xì)胞。

7.一種將間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為胰腺干細(xì)胞的方法，其包括步驟：將間充質(zhì)干細(xì)胞依次用權(quán)利要求3或4所述的試劑盒中的培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和權(quán)利要求1或2中所述的培養(yǎng)基C進(jìn)行培養(yǎng)，得到胰腺干細(xì)胞，其中所述間充質(zhì)干細(xì)胞采用常規(guī)方法獲得。