[發(fā)明專利]一種適用于對氨基偶氮苯的人工抗原合成方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210369910.8 | 申請日： | 2012-09-29 |
| 公開（公告）號： | CN102827271A | 公開（公告）日： | 2012-12-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 胥傳來;李灼坤;匡華;王風(fēng)艷;王利兵;劉麗強(qiáng);胡擁明 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C07K14/765 | 分類號： | C07K14/765;C07K14/77 |
| 代理公司： | 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 32104 | 代理人： | 時旭丹;劉品超 |
| 地址： | 214122 江蘇省無錫市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 適用于 氨基 偶氮 人工 抗原 合成 方法 | ||
1.一種適用于對氨基偶氮苯的通用人工抗原的合成方法，其特征在于分別以對氨基苯丁酸和對氨基苯乙酸進(jìn)行重氮化，重氮化產(chǎn)物分別與苯胺進(jìn)行反應(yīng)，從而獲得2個針對對氨基偶氮苯的衍生物1：對氨基偶氮苯丁酸，對氨基偶氮苯的衍生物2：對氨基偶氮苯乙酸；同時以對氨基偶氮苯丁酸為半抗原，用活性酯法將其與載體蛋白BSA偶聯(lián)作為免疫原用來免疫兔子產(chǎn)生抗體；以對氨基偶氮苯乙酸為半抗原，用活性酯法將其與載體蛋白OVA偶聯(lián)作為包被原，用來建立酶聯(lián)免疫檢測方法；
（1）對氨基偶氮苯人工抗原的制備
取0.5mL的含有0.1mmol對氨基偶氮苯衍生物1的N,N-二甲基甲酰胺DMF，加入0.15mmol碳化二亞胺EDC和0.15mmol?N-羥基琥珀酰亞胺NHS室溫避光反應(yīng)3h，為A液；將0.0025mmol?牛血清蛋白BSA溶解到0.01M、pH7.4的磷酸鹽PBS緩沖液中，為B液；然后將A液緩慢滴加到B液中，室溫反應(yīng)6h，離心去掉沉淀，取上清液即得人工抗原混合液；
透析袋前處理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去離子水沖洗3min，保存在4℃去離子水中備用；
將人工抗原混合液移入透析袋中，用2L的0.01M的PBS溶液透析2次和2L的去離子水透析2次，總計透析3天；最后使用凍干法將透析袋中的液體制成粉末，即得對氨基偶氮苯人工抗原；
（2）對氨基偶氮苯包被原的制備
將步驟（1）中的對氨基偶氮苯衍生物1替換為對氨基偶氮苯衍生物2，其余操作均與步驟（1）相同，即得對氨基偶氮苯包被原。
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