[發明專利]苯乙醇胺A的免疫膠體金檢測卡及其制備方法

無效

• 申請號: 201210366789.3
• 申請日: 2012-09-27
• 公開（公告）號: CN102901819A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 杜道林;洪霞;張禎;薛永來
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.苯乙醇胺A膠體金檢測卡，其特征在于按照下述步驟制備得到：

膠體金溶液制備：取1?L?三角燒瓶1個，加入超純水495?mL，而后加入1%氯金酸HAuCl₄·3H₂O?5?mL，配制成500?mL?0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續攪拌的情況下加入1%檸檬酸三鈉Na₃C₆H₅O₇·2H₂O溶液5-7?mL，繼續攪拌加熱，當溶液的顏色完全變為透明的紫紅色時，維持5?min后停止加熱，補水至原體積，冷卻至室溫，2-8℃保存備用；

抗體的預處理：將要標記的苯乙醇胺A抗體在1000?r/min,?4℃條件下，離心20?min，取上清，用0.01?mol/L?PBS稀釋成1?mg/mL；或者用0.01?mol/L?PBS稀釋成1?mg/mL，過0.22?μm濾膜；

膠體金標記物的制備：取步驟(1)中的膠體金溶液40?mL，用0.25?mol/L?K₂CO₃調節膠體金溶液pH至?8.5，電磁攪拌器250?r/min攪拌，逐滴加入4?mL?含0.3?mg?抗體蛋白的蛋白溶液，反應10?min；逐滴加入4?mL?10%?BSA，繼續攪拌反應10?min；金標抗體溶液常溫1500?r/min離心10?min，棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；紅色上清溶液4℃，12000?r/min?離心20?min，棄上清，收集沉淀，將沉淀用金標抗體稀釋液定容至1?mL，制備成苯乙醇胺A單克隆抗體膠體金標記物；

膠體金膜的制備：將步驟(3)苯乙醇胺A單克隆抗體膠體金標記物用劃膜儀以5?μL/cm的濃度均勻噴在載體玻璃纖維素膜上，室溫自然晾干或者37℃烘干3?h，制成含苯乙醇胺A單克隆抗體膠體金標記物的膠體金膜；

包被膜制備：將羊抗鼠IgG抗體、苯乙醇胺A蛋白質偶聯物稀釋成1?mg/mL，用劃膜儀依次以1?μL/cm的濃度噴涂在硝酸纖維素膜上，制備成包被膜，37℃包被2?h后，室溫自然晾干或者37℃烘干；

樣品墊前處理：將樣品墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，在空氣濕度低于60%的條件下，室溫自然晾干；

檢測卡的組裝：PVC膠板自上而下依次粘貼樣品墊、膠體金膜、包被膜和吸水墊，組裝成試紙條，切割成一定寬度的長條，再將試紙條安裝在長條扁平殼狀的檢測卡外殼中。

2.根據權利要求1所述的苯乙醇胺A膠體金檢測卡，其特征在于所述步驟(5)中所包被的檢測線T設在質控線C的下方；

所述步驟(6)中的樣品墊處理液是由1?g小牛血清蛋白和0.8?g氯化鈉，用含有0.5%TRITON-100的0.01?mol/L?PBS定容至100?mL。