[發(fā)明專利]小鼠肝臟羧酸酯酶基因克隆表達(dá)

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210366725.3
• 申請(qǐng)日: 2012-09-28
• 公開（公告）號(hào): CN102925468A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于源華;周帥;喬玉龍;王保學(xué);張昊;姚健;王巖;王維;鄔磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長春長理康源生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/55
• 分類號(hào): C12N15/55;C12N15/70;C12N9/18
• 代理公司: 長春眾益專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 22211
• 代理人: 紀(jì)尚

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

羧酸酯酶(Carboxylesterase，EC?3.1.1.1)?屬于B-酯酶，能夠催化水解含羧酸酯基的脂肪族和芳烴類有機(jī)化合物。羧酸酯酶在生物界分布極廣，從古細(xì)菌和真細(xì)菌、至真核微生物、昆蟲乃至哺乳動(dòng)物的各種組織均有活性較高的羧酸酯酶，尤其肝臟中的酶活性最高。羧酸酯酶可以催化酯水解、酯合成、酯交換等具有重要應(yīng)用價(jià)值的反應(yīng)，由于羧酸酯酶在食品、染料、皮革、紙張等工業(yè)中有多樣的應(yīng)用，因此羧酸酯酶在生物技術(shù)領(lǐng)域扮演著極其重要的角色。此外還被應(yīng)用于制藥、染料、殺蟲劑和殺菌劑等工農(nóng)業(yè)廢水中含羧酸酯基類毒性污染物的降解。

目前已經(jīng)從人、微生物及昆蟲中克隆到羧酸酯酶基因，其中從無色桿菌（Achromobacter?pichaudii）得到259aa的酶，其最高酶活為0.7U/ml；從嗜熱脂肪地芽胞桿菌（Geabacillusstearotheromphilus）得到29KDa的酶，其最高酶活為700U/ml；從嗜熱圓錐網(wǎng)團(tuán)菌（Dictyoglomus?turgidum）得到45KDa的酶，其最高酶活為80U/mg；從棉鈴蟲（Helicoverpa?armigera）得到100KDa的酶，其最高酶活為0.32mmol/100ul；從抗性蚊蟲（Culex?quinquefasciatus）得到60KDa的酶，其最高酶活為135U/mg。此外從斜紋夜蛾（Spodoptera?litura）、鉛青鏈霉菌（Deduc?Streptomyces?lividans）、野山蠶（Bombyx?momdarina?M）、銅綠蠅（Lucilia?cuprina）、稻褐飛虱（Nilaparvata?lugens）、大鼠（rat）以及人胎腦等來源均克隆得到相應(yīng)的羧酸酯酶。

然而，至今從小鼠肝臟中克隆獲得的羧酸酯酶報(bào)道很少，國外對(duì)其的研究應(yīng)用還很少（13篇研究論文，NCBI?PUBMID數(shù)據(jù)庫檢索），國內(nèi)至今未見研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是：提供一種小鼠肝臟羧酸酯酶基因克隆表達(dá)，它運(yùn)用基因克隆技術(shù)，成功克隆到小鼠肝臟羧酸酯酶（Mces1f）基因，與表達(dá)載體PET-32a連接后在大腸桿菌BL21中進(jìn)行了該基因的高效表達(dá)。而小鼠肝臟羧酸酯酶（Mces1f）基因?qū)秽ぁ⑽骶S因、甲基對(duì)硫磷、聯(lián)苯菊酯等農(nóng)藥有降解作用。

本發(fā)明的表達(dá)是：

1.以小鼠肝臟總RNA為模板，通過RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增了末端含有EcoR?I和Xho?I酶切位點(diǎn)的DNA片段，對(duì)其進(jìn)行了亞克隆及測序，用軟件Vector?NTI對(duì)所測定序列與對(duì)應(yīng)的NCBI序列（GenBank：BC013479.1）進(jìn)行比對(duì)分析，確定該基因?yàn)镸ces1f。

EcoR?I?起始密碼子