[發(fā)明專利]巴盧西班的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210364846.4
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN102875650A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 潘俊鋒;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京北翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

1.一種制備巴盧西班的方法，包括：

1)使Fmoc-N-Me-Orn(Boc)-ol在有機(jī)堿的存在下于溶劑中與羧基樹脂反應(yīng)，得到Fmoc-N-Me-Orn(Boc)-樹脂；

2)使Fmoc-N-Me-Orn(Boc)-樹脂在有機(jī)堿的存在下脫除Fmoc，然后在偶聯(lián)劑體系的存在下于溶劑中與Fmoc-HomoCys(mmt)-OH偶聯(lián)，重復(fù)脫Fmoc步驟和偶聯(lián)步驟，依次偶聯(lián)Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-AlloIle-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH和3-鹵代丙酸，得到線性肽樹脂

XCH₂CH₂CO-NH-D-Trp(Boc)-Ile-AlloIle-Asn(Trt)-HomoCys(mmt)-N-Me-Orn(Boc)-樹脂，

其中X=鹵素；

3)用側(cè)鏈脫保護(hù)液使所述線性肽樹脂脫除mmt側(cè)鏈；

4)用有機(jī)堿溶液使所述線性肽樹脂環(huán)化，得到巴盧西班肽樹脂；

5)巴盧西班肽樹脂在裂解液的存在下反應(yīng)得到巴盧西班。

2.權(quán)利要求1的方法，其中步驟4)中所述的有機(jī)堿例如，但不限于，DIPEA、TEA、TMP、四甲基胍、N-甲基嗎啉，優(yōu)選TEA、DIPEA和四甲基胍，其體積濃度為0.05-10%，優(yōu)選0.1-8%，更優(yōu)選0.5-5%；有機(jī)堿溶液體積用量為0.5-50mL/g樹脂，優(yōu)選1-30mL/g樹脂，更優(yōu)選2-20mL/g樹脂；其中步驟4)的反應(yīng)溫度為室溫。

3.權(quán)利要求1或2的方法，所述線性肽樹脂中的X，為氟、氯、溴、碘，優(yōu)選氯、溴、碘。

4.權(quán)利要求1或2的方法，步驟5)中獲得的巴盧西班可采用所有常用于純化肽的方法進(jìn)行純化，例如，但不限于，不良溶劑沉淀法、HPLC、凝膠色譜或離子色譜等，優(yōu)選先用不良溶劑沉淀，再借助HPLC進(jìn)一步純化。

5.權(quán)利要求1或2的方法，其中在步驟1)中，所述羧基樹脂包括，但不限于苯甲酸樹脂、羧基氯醋樹脂、羧基丁腈樹脂等，優(yōu)選苯甲酸樹脂；與氨基酸反應(yīng)前，所述羧基樹脂的替代度為0.05-3.0mmol/g，優(yōu)選0.1-2.5mmolg，更優(yōu)選0.2-2.0mmol/g。

6.權(quán)利要求1或2的方法，其中在步驟1)中，與氨基酸反應(yīng)后，樹脂的替代度為0.05-1.5mmol/g，優(yōu)選0.1-1.2mmol/g，更優(yōu)選0.2-1.0mmol/g。

7.權(quán)利要求1或2的方法，其中在步驟1)中，F(xiàn)moc-N-Me-Orn(Boc)-ol與羧基樹脂反應(yīng)之后，優(yōu)選地在適量有機(jī)堿的存在下用適量的醇（例如，但不限于甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇等，優(yōu)選甲醇）處理樹脂。

8.權(quán)利要求1或2的方法，其中在步驟2)中，使Fmoc脫除的試劑為步驟1)中所述的有機(jī)堿的溶液，優(yōu)選體積濃度為5-90%，優(yōu)選10-70%，更優(yōu)選15-50%的哌啶的DMF溶液，其用量不受限制，適量即可。

9.權(quán)利要求1或2的方法，其中在步驟3)中，使巴盧西班線性肽樹脂中的HomoCys(mmt)脫除側(cè)鏈mmt的試劑是體積比為1-3:0-5:0-3:89-99的TFA:TES:EDT:DCM側(cè)鏈脫保護(hù)液。

10.權(quán)利要求1或2的方法，其中在步驟5)中，所述裂解液為體積比為85-95:2-5:0-3:0-2:1-5的TFA:TIS:EDT:PhOH:H₂O混合物；裂解液的用量為2-30mL/g樹脂，優(yōu)選3-20mL/g樹脂，更優(yōu)選5-15mL/g樹脂，反應(yīng)時間為0.5-10小時，優(yōu)選1-8小時，更優(yōu)選1.5-5小時。