[發明專利]一種能穩定保存的人NT-proBNP制劑及其制備方法

無效

• 申請號: 201210364564.4
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN102879589A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 許秀麗;田亞平;劉培;郝慶欽
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/68;C12N15/70
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 向華

【技術領域】

本發明涉及一種能穩定保存的人NT-proBNP制劑及其制備方法，以及能高產量重組表達人NT-proBNP的方法，屬于醫藥生物技術領域。

【背景技術】

利鈉肽（NP）家族現在越來越受到重視，大多數人類利鈉肽家族是由心臟分泌的，并起到控制水鹽平衡、維持壓力調節穩態等作用。心血管利鈉肽內分泌組分包括ANP、BNP、CNP、DNP和VNP。盡管分型各不相同，但是大多數種類的利鈉肽在相同種屬間的進化是相當保守的。在種屬內存在差異的（哺乳動物）只有BNP及其氨基末端前體BNP（NT-proBNP）。

B型利鈉肽除了具有利鈉肽共有的那些功能外，還可能具有抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統、抗心肌纖維化、強松弛性等作用。BNP主要在心臟表達，尤以心房表達更加豐富。另外，BNP的釋放受到壓力和容量兩種因素調節，進而能預示出心室容積擴大、左室舒張末期壓增大，心室超負荷以及心臟損傷程度等一系列心血管異常情況。

NT-proBNP是在BNP前體（proBNP）形成BNP過程中產生的一種無生物活性的蛋白，在代謝過程中，產生的BNP與NT-proBNP含量相同，所以NT-proBNP與BNP同樣可以作為一種心臟標志物。但是NT-proBNP缺乏主動清除機制，NT-proBNP在體液中的半衰期要長，濃度更大，更容易檢測，并且檢測樣本更容易獲得，因此其已經成為一種主要的心臟檢測指標。

2011年9月29日，世界心臟聯盟在第12個“世界心臟日”上提到心血管病是威脅人類健康的“第一殺手”，每年全球有1710萬人死于心血管疾病，約占全球死亡人數的1/3。2010年中國心血管病報告指出，我國人群心血管病（心臟病、腦卒中）的發病和死亡率呈持續上升階段。估計全國心血管病2.3億人，全年死于心血管病300萬人，占總死亡原因的41%，居各種死因的首位。大多數的心血管病都是可以通過減少誘因，早期診斷等手段進行預防的。

1991年DzauV等提出的心血管病時間鏈，自此，人們開始認識到心血管病不是一種獨立的突然發生的病癥，而是許多相互聯系的因素不斷發展的過程。心力衰竭處于心血管事件鏈的末期，早期診斷對于心衰來說，尤為重要。目前心衰常用的診斷方法主要有幾種，但是都有各自的局限性。癥狀判斷如呼吸困難、水鈉潴留等在診斷時不能特異性診斷。輔助檢查如心電圖、胸片、肺功能等缺乏標準化的判斷標準，因此對結果的闡述具有主觀性。實驗室檢查如血小板計數，甘油三酯等，雖然客觀但不便于檢測心衰的預后和治療。影像學檢查如心臟超聲是心衰診斷的“金標準”，但不同中心檢查的結果沒有可比性，而且價格高不便于實時監測及常規檢查。

自2006年11月12-15日在伊利諾伊州芝加哥舉辦的美國心臟協會科學會議上許多新生物標記檢測帶頭人進行講座并闡述了NT-proBNP的臨床意義后，NT-proBNP檢測在世界范圍內推廣起來，許多醫院實驗室被要求進行NT-proBNP的檢測。NT-proBNP免疫檢測的問世，解決了以上診斷方法的很多問題。NT-proBNP檢測客觀、能夠實現定量、重復性好、特異性高、敏感快速，所以該診斷檢測自問世以來，被譽為“劃時代的心衰標志物”。NT-proBNP不僅可以用于心衰治療，目前許多文獻報道NT-proBNP可以用于心肌損傷、血栓、炎癥、血脂狀態、2型糖尿病等其他疾病診斷，未來具有良好的應用前景。

2000年11月22日，美國FDA首次批準了Biosite?Diagnostics公司的BNP輔助診斷試劑盒。2002年11月19日，首個NT-proBNP免疫檢測試劑盒由羅氏診斷公司制造并上市。雖然NT-proBNP檢測已經廣泛應用，但是目前并沒有統一的標準品。NT-proBNP標準品是目前國內診斷市場亟待解決的一個問題。

由于NT-proBNP目前已經作為生化檢驗中重要的一種檢測指標，因此NT-proBNP標準品目前在臨床應用廣泛，NT-proBNP標準品的用量非常大，目前常用的表達系統主要有大腸桿菌表達系統、畢氏酵母表達系統、真核細胞表達系統等。然而，真核表達系統投資巨大，表達周期長，生產條件要求高。并且NT-proBNP氨基酸結構簡單，并沒有復雜的翻譯后加工過程，所以選擇大腸桿菌表達系統是經濟實用，表達產率高，純化工藝簡單的一種生產策略。目前，市面上的NT-proBNP標準品大多是采用大腸桿菌表達系統表達后再純化的產品。因其需求量大，因此需要能高產量重組表達NT-proBNP的方法。